植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2012年
2期
146-153
,共8页
咸洪泉%汤伟%张丽青%李安娜%李多川
鹹洪泉%湯偉%張麗青%李安娜%李多川
함홍천%탕위%장려청%리안나%리다천
黄蓝状菌%几丁质酶%trchi1%克隆%表达%抑菌活性
黃藍狀菌%幾丁質酶%trchi1%剋隆%錶達%抑菌活性
황람상균%궤정질매%trchi1%극륭%표체%억균활성
为研究黄蓝状菌(Talaromyces flavus)几丁质酶性质和作用,通过RT-PCR、3′RACE及5′TAIL-PCR技术克隆了一个黄蓝状菌几丁质酶基因tfchi1,该基因全长为2561 bp,含有6个内含子,包含一个1194bp的ORF,编码397个氨基酸,分子量为43.47 kDa,属于糖苷水解酶第18家族.利用基因重组的方法构建酵母分泌型表达载体pPIC9K/tfchi1,并转化毕赤酵母,筛选得到一株高效表达几丁质酶的工程菌GS-TFCHI1-9,甲醇诱导第7d酶活性最高,达32.29 U·mL-1.SDS-PAGE检测纯化重组蛋白的分子量约44 kDa.重组几丁质酶Tfchi1最适反应温度为35℃,最适反应pH值为5.5,在pH 6～8之间稳定.Zn2+、Cu2+对Tfchi1活性有明显的抑制作用.抑菌活性测定结果显示,Tfchi1可明显抑制敏感植物病原真菌的菌丝生长和分生孢子萌发.该酶在几丁质资源的开发利用和生物防治等领域具有较广的应用前景.
為研究黃藍狀菌(Talaromyces flavus)幾丁質酶性質和作用,通過RT-PCR、3′RACE及5′TAIL-PCR技術剋隆瞭一箇黃藍狀菌幾丁質酶基因tfchi1,該基因全長為2561 bp,含有6箇內含子,包含一箇1194bp的ORF,編碼397箇氨基痠,分子量為43.47 kDa,屬于糖苷水解酶第18傢族.利用基因重組的方法構建酵母分泌型錶達載體pPIC9K/tfchi1,併轉化畢赤酵母,篩選得到一株高效錶達幾丁質酶的工程菌GS-TFCHI1-9,甲醇誘導第7d酶活性最高,達32.29 U·mL-1.SDS-PAGE檢測純化重組蛋白的分子量約44 kDa.重組幾丁質酶Tfchi1最適反應溫度為35℃,最適反應pH值為5.5,在pH 6～8之間穩定.Zn2+、Cu2+對Tfchi1活性有明顯的抑製作用.抑菌活性測定結果顯示,Tfchi1可明顯抑製敏感植物病原真菌的菌絲生長和分生孢子萌髮.該酶在幾丁質資源的開髮利用和生物防治等領域具有較廣的應用前景.
위연구황람상균(Talaromyces flavus)궤정질매성질화작용,통과RT-PCR、3′RACE급5′TAIL-PCR기술극륭료일개황람상균궤정질매기인tfchi1,해기인전장위2561 bp,함유6개내함자,포함일개1194bp적ORF,편마397개안기산,분자량위43.47 kDa,속우당감수해매제18가족.이용기인중조적방법구건효모분비형표체재체pPIC9K/tfchi1,병전화필적효모,사선득도일주고효표체궤정질매적공정균GS-TFCHI1-9,갑순유도제7d매활성최고,체32.29 U·mL-1.SDS-PAGE검측순화중조단백적분자량약44 kDa.중조궤정질매Tfchi1최괄반응온도위35℃,최괄반응pH치위5.5,재pH 6～8지간은정.Zn2+、Cu2+대Tfchi1활성유명현적억제작용.억균활성측정결과현시,Tfchi1가명현억제민감식물병원진균적균사생장화분생포자맹발.해매재궤정질자원적개발이용화생물방치등영역구유교엄적응용전경.
