中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2007年
5期
457-460
,共4页
赵昆朋%王玉刚%陈居杲%黎燕%马远方%沈倍奋
趙昆朋%王玉剛%陳居杲%黎燕%馬遠方%瀋倍奮
조곤붕%왕옥강%진거고%려연%마원방%침배강
TRAIL%原核表达%免疫印迹
TRAIL%原覈錶達%免疫印跡
TRAIL%원핵표체%면역인적
目的 获得人源TRAIL胞外段结构域在大肠杆菌中可溶性表达,并初步鉴定其功能.方法 RT-PCR法从人外周血单个核细胞中扩增TRAIL胞外段基因,克隆入pGEM-T-Easy载体,DNA序列测定鉴定正确性.为了便于纯化目的蛋白,将其克隆入原核表达载体pET-30a,并在其氨基端加上组氨酸标签.采用E.coli BL21(DE3)表达,Ni亲和柱分离纯化目的蛋白.SDS-PAGE和Western blot鉴定原核表达产物.MTT法、PI染色法及瑞氏-姬姆萨染色法观察TRAIL-His蛋白的生物学活性.结果 所表达目的蛋白相对分子质量(Mr)与预期蛋白Mr相一致,该蛋白分别可以与抗TRAIL多克隆抗体及抗组氨酸标签抗体反应,并可抑制人淋巴瘤细胞系Jurkat细胞的增殖和诱导Jurkat细胞凋亡.结论 获得了具有生物学活性的TRAIL蛋白,为对其生物学功能及肿瘤治疗的进一步研究奠定了基础.
目的 穫得人源TRAIL胞外段結構域在大腸桿菌中可溶性錶達,併初步鑒定其功能.方法 RT-PCR法從人外週血單箇覈細胞中擴增TRAIL胞外段基因,剋隆入pGEM-T-Easy載體,DNA序列測定鑒定正確性.為瞭便于純化目的蛋白,將其剋隆入原覈錶達載體pET-30a,併在其氨基耑加上組氨痠標籤.採用E.coli BL21(DE3)錶達,Ni親和柱分離純化目的蛋白.SDS-PAGE和Western blot鑒定原覈錶達產物.MTT法、PI染色法及瑞氏-姬姆薩染色法觀察TRAIL-His蛋白的生物學活性.結果 所錶達目的蛋白相對分子質量(Mr)與預期蛋白Mr相一緻,該蛋白分彆可以與抗TRAIL多剋隆抗體及抗組氨痠標籤抗體反應,併可抑製人淋巴瘤細胞繫Jurkat細胞的增殖和誘導Jurkat細胞凋亡.結論 穫得瞭具有生物學活性的TRAIL蛋白,為對其生物學功能及腫瘤治療的進一步研究奠定瞭基礎.
목적 획득인원TRAIL포외단결구역재대장간균중가용성표체,병초보감정기공능.방법 RT-PCR법종인외주혈단개핵세포중확증TRAIL포외단기인,극륭입pGEM-T-Easy재체,DNA서렬측정감정정학성.위료편우순화목적단백,장기극륭입원핵표체재체pET-30a,병재기안기단가상조안산표첨.채용E.coli BL21(DE3)표체,Ni친화주분리순화목적단백.SDS-PAGE화Western blot감정원핵표체산물.MTT법、PI염색법급서씨-희모살염색법관찰TRAIL-His단백적생물학활성.결과 소표체목적단백상대분자질량(Mr)여예기단백Mr상일치,해단백분별가이여항TRAIL다극륭항체급항조안산표첨항체반응,병가억제인림파류세포계Jurkat세포적증식화유도Jurkat세포조망.결론 획득료구유생물학활성적TRAIL단백,위대기생물학공능급종류치료적진일보연구전정료기출.
