蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2007年
1期
36-42
,共7页
王玉军%徐世清%司马杨虎%吴阳春%刘莹%柳学广%丛海峰
王玉軍%徐世清%司馬楊虎%吳暘春%劉瑩%柳學廣%叢海峰
왕옥군%서세청%사마양호%오양춘%류형%류학엄%총해봉
家蚕%滞育%时间间隔测定酶%酯酶A4基因%cDNA序列
傢蠶%滯育%時間間隔測定酶%酯酶A4基因%cDNA序列
가잠%체육%시간간격측정매%지매A4기인%cDNA서렬
家蚕滞育生物钟是依赖卵内酯酶A4(EA4)的倒计时型生物钟.EA4是具时间间隔测定酶(time interval measuring enzyme,TIME)功能的蛋白质.根据家蚕EA4测定的氨基酸序列,以第3天龄雌蛹脂肪体和卵巢总RNA为模板,利用简并引物RT-PCR方法,得到308 bp的部分ea4序列,其1-144 nt和145-308 nt分别与家蚕全基因组鸟枪序列(whole genome shotgun sequence,WGS) AADK01019126.1的5 595-5 738 nt及WGS AADK01014467.1的8 636-8 473 nt有95%和98%的一致性.根据获得的ea4基因片段序列,利用生物信息学方法和家蚕基因组数据预测了ea4基因的完整cDNA序列,设计特异引物,以雌蛹脂肪体和卵巢RNA为模板,进行RT-PCR得到完整的cDNA.ea4基因的cDNA全长519 bp,其中1-48 bp为信号肽序列,49-519 bp编码的氨基酸与蛋白质纯化后测序EA4部分的一致性为98%,C末端存在3个氨基酸的差异,其中第156位为新确定氨基酸.
傢蠶滯育生物鐘是依賴卵內酯酶A4(EA4)的倒計時型生物鐘.EA4是具時間間隔測定酶(time interval measuring enzyme,TIME)功能的蛋白質.根據傢蠶EA4測定的氨基痠序列,以第3天齡雌蛹脂肪體和卵巢總RNA為模闆,利用簡併引物RT-PCR方法,得到308 bp的部分ea4序列,其1-144 nt和145-308 nt分彆與傢蠶全基因組鳥鎗序列(whole genome shotgun sequence,WGS) AADK01019126.1的5 595-5 738 nt及WGS AADK01014467.1的8 636-8 473 nt有95%和98%的一緻性.根據穫得的ea4基因片段序列,利用生物信息學方法和傢蠶基因組數據預測瞭ea4基因的完整cDNA序列,設計特異引物,以雌蛹脂肪體和卵巢RNA為模闆,進行RT-PCR得到完整的cDNA.ea4基因的cDNA全長519 bp,其中1-48 bp為信號肽序列,49-519 bp編碼的氨基痠與蛋白質純化後測序EA4部分的一緻性為98%,C末耑存在3箇氨基痠的差異,其中第156位為新確定氨基痠.
가잠체육생물종시의뢰란내지매A4(EA4)적도계시형생물종.EA4시구시간간격측정매(time interval measuring enzyme,TIME)공능적단백질.근거가잠EA4측정적안기산서렬,이제3천령자용지방체화란소총RNA위모판,이용간병인물RT-PCR방법,득도308 bp적부분ea4서렬,기1-144 nt화145-308 nt분별여가잠전기인조조창서렬(whole genome shotgun sequence,WGS) AADK01019126.1적5 595-5 738 nt급WGS AADK01014467.1적8 636-8 473 nt유95%화98%적일치성.근거획득적ea4기인편단서렬,이용생물신식학방법화가잠기인조수거예측료ea4기인적완정cDNA서렬,설계특이인물,이자용지방체화란소RNA위모판,진행RT-PCR득도완정적cDNA.ea4기인적cDNA전장519 bp,기중1-48 bp위신호태서렬,49-519 bp편마적안기산여단백질순화후측서EA4부분적일치성위98%,C말단존재3개안기산적차이,기중제156위위신학정안기산.
