广州管圆线虫组织蛋白酶Z基因的原核表达及免疫学分析
엄주관원선충조직단백매Z기인적원핵표체급면역학분석
Prokaryotic expression of cathepsin Z gene from Angiostrongylus cantonensis and the immunological analysis of the fusion protein
  • 万方数据
    中国人兽共患病学报 중국인수공환병학보
    CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
    2010年 9期 810-813,817 ,共5页

    岳永亮%于彦杰%杨潇%程梅%何蔼%曲振宇%刘静%王琳%李卓雅%詹希美

    악영량%우언걸%양소%정매%하애%곡진우%류정%왕림%리탁아%첨희미

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    目的 克隆并原核表达广州管圆线虫组织蛋白酶-Z基因,评价其融合蛋白在免疫诊断中的应用前景.方法 利用生物信息学分析工具,分析广州管圆线虫组织蛋白酶-Z的理化性质、结构与功能特征;克隆目的基因至原核表达载体pET30a(+),经PCR、双酶切鉴定后,IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE鉴定,融合蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化;ELISA检测融合蛋白作为诊断抗原的敏感性及特异性.结果 该蛋白理化性质较稳定,含有分泌型信号肽;含有构成半胱氨酸蛋白酶催化中心的Cys84、His232和Asn253三个氨基酸残基.成功构建了重组质粒且目的基因在E.coli BL21 中获得高效表达,经亲和层析获得了纯化的融合蛋白.融合蛋白可被其免疫的BALB/c小鼠血清及感染广州管圆线虫的小鼠血清识别;作为包被抗原用于ELISA检测小鼠血清其敏感性及特异性均为100%与粗抗原无差别,检测其他寄生虫病人血清及正常人血清其特异性分别为100%和97.4%与粗抗原相比特异性较高.结论 广州管圆线虫组织蛋白酶-Z与多个物种组织蛋白酶-Z 基因同源,是一种半胱氨酸蛋白酶,含有信号肽,可能是重要的虫体分泌排泄抗原成分,在广州管圆线虫病的免疫诊断方面有潜在的应用前景.
    목적 극륭병원핵표체엄주관원선충조직단백매-Z기인,평개기융합단백재면역진단중적응용전경.방법 이용생물신식학분석공구,분석엄주관원선충조직단백매-Z적이화성질、결구여공능특정;극륭목적기인지원핵표체재체pET30a(+),경PCR、쌍매절감정후,IPTG유도표체,표체산물통과SDS-PAGE감정,융합단백용His-얼단백순화주순화;ELISA검측융합단백작위진단항원적민감성급특이성.결과 해단백이화성질교은정,함유분비형신호태;함유구성반광안산단백매최화중심적Cys84、His232화Asn253삼개안기산잔기.성공구건료중조질립차목적기인재E.coli BL21 중획득고효표체,경친화층석획득료순화적융합단백.융합단백가피기면역적BALB/c소서혈청급감염엄주관원선충적소서혈청식별;작위포피항원용우ELISA검측소서혈청기민감성급특이성균위100%여조항원무차별,검측기타기생충병인혈청급정상인혈청기특이성분별위100%화97.4%여조항원상비특이성교고.결론 엄주관원선충조직단백매-Z여다개물충조직단백매-Z 기인동원,시일충반광안산단백매,함유신호태,가능시중요적충체분비배설항원성분,재엄주관원선충병적면역진단방면유잠재적응용전경.
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