天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2012年
6期
529-532,后插1
,共5页
黄丽%尹洁%丁建民%宋娟%高星杰%经翔%杨洁
黃麗%尹潔%丁建民%宋娟%高星傑%經翔%楊潔
황려%윤길%정건민%송연%고성걸%경상%양길
RNA干扰%细胞系,肿瘤%质粒%慢病毒载体%p100蛋白%HepG2细胞系
RNA榦擾%細胞繫,腫瘤%質粒%慢病毒載體%p100蛋白%HepG2細胞繫
RNA간우%세포계,종류%질립%만병독재체%p100단백%HepG2세포계
目的:用表达shRNA的干扰慢病毒载体系统构建p100基因稳定沉默的HepG2人肝癌细胞系.方法:通过RNAi序列设计软件进行p100干扰片段设计,筛选出p100基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的Oligo DNA并构建p LKO.3G-p1001慢病毒载体,用双酶切及测序进行鉴定.将构建好的p100 shRNA表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒.运用病毒颗粒感染HepG2细胞,获得p100稳定沉默的细胞系.荧光显微镜下观察感染效率,利用Western blot方法检测稳定细胞株中p100的沉默效果.结果:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒载体,并获得了稳定沉默p100及对照的HepG2细胞株.慢病毒感染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察到90％以上细胞发出绿色荧光,Western blot证实干扰p100后,HepG2细胞株中p100蛋白表达水平明显降低.结论:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒干扰载体及p100稳定沉默的HepG2细胞系.
目的:用錶達shRNA的榦擾慢病毒載體繫統構建p100基因穩定沉默的HepG2人肝癌細胞繫.方法:通過RNAi序列設計軟件進行p100榦擾片段設計,篩選齣p100基因的RNAi有效靶序列,進一步閤成靶序列的Oligo DNA併構建p LKO.3G-p1001慢病毒載體,用雙酶切及測序進行鑒定.將構建好的p100 shRNA錶達質粒與慢病毒包裝質粒共轉染至包裝細胞293T,包裝產生病毒顆粒.運用病毒顆粒感染HepG2細胞,穫得p100穩定沉默的細胞繫.熒光顯微鏡下觀察感染效率,利用Western blot方法檢測穩定細胞株中p100的沉默效果.結果:成功構建瞭具有p100榦擾效果的慢病毒載體,併穫得瞭穩定沉默p100及對照的HepG2細胞株.慢病毒感染HepG2細胞後,熒光顯微鏡下觀察到90％以上細胞髮齣綠色熒光,Western blot證實榦擾p100後,HepG2細胞株中p100蛋白錶達水平明顯降低.結論:成功構建瞭具有p100榦擾效果的慢病毒榦擾載體及p100穩定沉默的HepG2細胞繫.
목적:용표체shRNA적간우만병독재체계통구건p100기인은정침묵적HepG2인간암세포계.방법:통과RNAi서렬설계연건진행p100간우편단설계,사선출p100기인적RNAi유효파서렬,진일보합성파서렬적Oligo DNA병구건p LKO.3G-p1001만병독재체,용쌍매절급측서진행감정.장구건호적p100 shRNA표체질립여만병독포장질립공전염지포장세포293T,포장산생병독과립.운용병독과립감염HepG2세포,획득p100은정침묵적세포계.형광현미경하관찰감염효솔,이용Western blot방법검측은정세포주중p100적침묵효과.결과:성공구건료구유p100간우효과적만병독재체,병획득료은정침묵p100급대조적HepG2세포주.만병독감염HepG2세포후,형광현미경하관찰도90％이상세포발출록색형광,Western blot증실간우p100후,HepG2세포주중p100단백표체수평명현강저.결론:성공구건료구유p100간우효과적만병독간우재체급p100은정침묵적HepG2세포계.
