天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2012年
6期
543-546
,共4页
刘金泉%肖茜%李宁%李进%韩梅%方佩华
劉金泉%肖茜%李寧%李進%韓梅%方珮華
류금천%초천%리저%리진%한매%방패화
碘化物过氧化物酶%甲状腺%遗传载体%聚合酶链反应%大肠杆菌%基因克隆
碘化物過氧化物酶%甲狀腺%遺傳載體%聚閤酶鏈反應%大腸桿菌%基因剋隆
전화물과양화물매%갑상선%유전재체%취합매련반응%대장간균%기인극륭
目的:探索克隆人甲状腺过氧化物酶(hTPO)膜外区基因并构建其杆状病毒表达载体.方法:PCR扩增hT-PO膜外区基因,并将其先后重组入pGEM3zf(+)质粒和pFastBacl质粒,以hTPO-pFastBAC1质粒转染E.coli DH 10Bac大肠杆菌,获得重组hTPO杆状病毒表达载体(hTPO-Bacmid),每一步均以PCR及酶切、基因测序等方法鉴定其正确性.结果:与预期一致,PCR扩增hTPO膜外区基因的产物为一约2.5 kb的条带；hTPO-pGEM3zf(+)经EcoR Ⅰ+HindⅢ、EcoR Ⅰ+SalⅠ双酶切后均获得2.5和3.2 kb条带；hTPO-pFastBAC1以EcoR Ⅰ+HindⅢ双酶切得到2.5和4.8 kb的带,均符合预期.分别以重组hTPO-pGEM3zf(+)质粒、hTPO-pFastBAC1质粒为模板进行PCR扩增鉴定,均得到约2.5 kb的目的条带；对hTPO-Bacmid进行PCR鉴定,得到约4.8 kb的片段.对hTPO-pFastBAC1上下游接口测序正确无误.结论:本研究成功克隆了hTPO膜外区基因,并完成了其杆状病毒表达载体hTPO-Bacmid的构建.
目的:探索剋隆人甲狀腺過氧化物酶(hTPO)膜外區基因併構建其桿狀病毒錶達載體.方法:PCR擴增hT-PO膜外區基因,併將其先後重組入pGEM3zf(+)質粒和pFastBacl質粒,以hTPO-pFastBAC1質粒轉染E.coli DH 10Bac大腸桿菌,穫得重組hTPO桿狀病毒錶達載體(hTPO-Bacmid),每一步均以PCR及酶切、基因測序等方法鑒定其正確性.結果:與預期一緻,PCR擴增hTPO膜外區基因的產物為一約2.5 kb的條帶；hTPO-pGEM3zf(+)經EcoR Ⅰ+HindⅢ、EcoR Ⅰ+SalⅠ雙酶切後均穫得2.5和3.2 kb條帶；hTPO-pFastBAC1以EcoR Ⅰ+HindⅢ雙酶切得到2.5和4.8 kb的帶,均符閤預期.分彆以重組hTPO-pGEM3zf(+)質粒、hTPO-pFastBAC1質粒為模闆進行PCR擴增鑒定,均得到約2.5 kb的目的條帶；對hTPO-Bacmid進行PCR鑒定,得到約4.8 kb的片段.對hTPO-pFastBAC1上下遊接口測序正確無誤.結論:本研究成功剋隆瞭hTPO膜外區基因,併完成瞭其桿狀病毒錶達載體hTPO-Bacmid的構建.
목적:탐색극륭인갑상선과양화물매(hTPO)막외구기인병구건기간상병독표체재체.방법:PCR확증hT-PO막외구기인,병장기선후중조입pGEM3zf(+)질립화pFastBacl질립,이hTPO-pFastBAC1질립전염E.coli DH 10Bac대장간균,획득중조hTPO간상병독표체재체(hTPO-Bacmid),매일보균이PCR급매절、기인측서등방법감정기정학성.결과:여예기일치,PCR확증hTPO막외구기인적산물위일약2.5 kb적조대；hTPO-pGEM3zf(+)경EcoR Ⅰ+HindⅢ、EcoR Ⅰ+SalⅠ쌍매절후균획득2.5화3.2 kb조대；hTPO-pFastBAC1이EcoR Ⅰ+HindⅢ쌍매절득도2.5화4.8 kb적대,균부합예기.분별이중조hTPO-pGEM3zf(+)질립、hTPO-pFastBAC1질립위모판진행PCR확증감정,균득도약2.5 kb적목적조대；대hTPO-Bacmid진행PCR감정,득도약4.8 kb적편단.대hTPO-pFastBAC1상하유접구측서정학무오.결론:본연구성공극륭료hTPO막외구기인,병완성료기간상병독표체재체hTPO-Bacmid적구건.
