石河子大学学报（自然科学版）
石河子大學學報（自然科學版）
석하자대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHIHEZI UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2005年
2期
166-169
,共4页
罗星%孔雪%徐坚%于娜%张峪涵%仙玲玲%杨磊%黄瑾
囉星%孔雪%徐堅%于娜%張峪涵%仙玲玲%楊磊%黃瑾
라성%공설%서견%우나%장욕함%선령령%양뢰%황근
NT3%酵母双杂交%诱饵质粒
NT3%酵母雙雜交%誘餌質粒
NT3%효모쌍잡교%유이질립
构建和转化神经营养素-3(neurotrophin-3,NT3)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究NT3的功能及作用机制奠定基础.用PCR扩增NT3基因cDNA中编码完整开放读框的基因片段;将该基因片段与pLexA载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入EGY48[p8op-LacZ]酵母菌株.结果成功构建pLexA-NT3重组质粒.转化有重组质粒和pLexA空载体的二种EGY48[p8op-LacZ]酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培养基中长成白色菌落(同0时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落),但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培养基中生长,在SD/-His/-Ura液中培养16 h后,OD600均值均为0.8±0.1.这表明,重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,也没有酵母毒性作用.因此,构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选.
構建和轉化神經營養素-3(neurotrophin-3,NT3)的酵母誘餌重組質粒,為通過酵母雙雜交研究NT3的功能及作用機製奠定基礎.用PCR擴增NT3基因cDNA中編碼完整開放讀框的基因片段;將該基因片段與pLexA載體定嚮重組;用酶切和測序鑒定重組質粒;將覈苷痠序列正確的重組質粒轉化入EGY48[p8op-LacZ]酵母菌株.結果成功構建pLexA-NT3重組質粒.轉化有重組質粒和pLexA空載體的二種EGY48[p8op-LacZ]酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培養基中長成白色菌落(同0時,轉化pLexA-pos暘性對照質粒的酵母菌在相同條件下長成藍色菌落),但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培養基中生長,在SD/-His/-Ura液中培養16 h後,OD600均值均為0.8±0.1.這錶明,重組質粒錶達的融閤蛋白沒有激活LEU2和lacZ酵母報告基因錶達的活性,也沒有酵母毒性作用.因此,構建的誘餌重組質粒可以用于下一階段的人胎腦cDNA文庫篩選.
구건화전화신경영양소-3(neurotrophin-3,NT3)적효모유이중조질립,위통과효모쌍잡교연구NT3적공능급작용궤제전정기출.용PCR확증NT3기인cDNA중편마완정개방독광적기인편단;장해기인편단여pLexA재체정향중조;용매절화측서감정중조질립;장핵감산서렬정학적중조질립전화입EGY48[p8op-LacZ]효모균주.결과성공구건pLexA-NT3중조질립.전화유중조질립화pLexA공재체적이충EGY48[p8op-LacZ]효모도능재SD/Gal/Raf/-His/-Ura배양기중장성백색균락(동0시,전화pLexA-pos양성대조질립적효모균재상동조건하장성람색균락),단도불능재SD/-His/-Leu/-Ura배양기중생장,재SD/-His/-Ura액중배양16 h후,OD600균치균위0.8±0.1.저표명,중조질립표체적융합단백몰유격활LEU2화lacZ효모보고기인표체적활성,야몰유효모독성작용.인차,구건적유이중조질립가이용우하일계단적인태뇌cDNA문고사선.
