中国胸心血管外科临床杂志
中國胸心血管外科臨床雜誌
중국흉심혈관외과림상잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL THORACIC AND CARDIOVASCULAR SURGERY
2005年
3期
185-188
,共4页
葛建军%周正春%陈兵%张胜权%罗欣%徐从贞%汪思应
葛建軍%週正春%陳兵%張勝權%囉訢%徐從貞%汪思應
갈건군%주정춘%진병%장성권%라흔%서종정%왕사응
血管内皮生长因子%基因克隆%基因表达
血管內皮生長因子%基因剋隆%基因錶達
혈관내피생장인자%기인극륭%기인표체
目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcDNA3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础. 方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,聚合酶链反应(PCR)法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-his-B中,构建pcDNA3.1/hVEGF165重组体.用脂质体介导将其转染COS-7细胞,蛋白印迹(Western blotting)法检测rhVEGF165的表达蛋白. 结果用RT-PCR方法从胎儿心肌组织中获得了正确的hVEGF165基因序列,并成功构建pcDNA3.1/hVEGF165,且实现转染COS-7细胞的瞬时表达. 结论构建的pcDNA3.1/hVEGF165 转染真核细胞COS-7能够表达rhVEGF蛋白.
目的剋隆人血管內皮生長因子(hVEGF)基因VEGF165片段,構建pcDNA3.1/hVEGF165,觀察其在COS-7細胞中的錶達,為基因治療缺血性心髒病的研究奠定基礎. 方法從閤法引產的胎兒心肌組織中提取總覈糖覈痠(RNA),應用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)方法穫得hVEGF165基因,將其重組入T載體,聚閤酶鏈反應(PCR)法鑒定併測序,雙酶切後剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1/myc-his-B中,構建pcDNA3.1/hVEGF165重組體.用脂質體介導將其轉染COS-7細胞,蛋白印跡(Western blotting)法檢測rhVEGF165的錶達蛋白. 結果用RT-PCR方法從胎兒心肌組織中穫得瞭正確的hVEGF165基因序列,併成功構建pcDNA3.1/hVEGF165,且實現轉染COS-7細胞的瞬時錶達. 結論構建的pcDNA3.1/hVEGF165 轉染真覈細胞COS-7能夠錶達rhVEGF蛋白.
목적극륭인혈관내피생장인자(hVEGF)기인VEGF165편단,구건pcDNA3.1/hVEGF165,관찰기재COS-7세포중적표체,위기인치료결혈성심장병적연구전정기출. 방법종합법인산적태인심기조직중제취총핵당핵산(RNA),응용역전록-취합매련반응(RT-PCR)방법획득hVEGF165기인,장기중조입T재체,취합매련반응(PCR)법감정병측서,쌍매절후극륭입진핵표체재체pcDNA3.1/myc-his-B중,구건pcDNA3.1/hVEGF165중조체.용지질체개도장기전염COS-7세포,단백인적(Western blotting)법검측rhVEGF165적표체단백. 결과용RT-PCR방법종태인심기조직중획득료정학적hVEGF165기인서렬,병성공구건pcDNA3.1/hVEGF165,차실현전염COS-7세포적순시표체. 결론구건적pcDNA3.1/hVEGF165 전염진핵세포COS-7능구표체rhVEGF단백.
