现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2008年
6期
877-880
,共4页
车昌燕%张国华%赵燕%张蕾%张云%王树惠%刘力
車昌燕%張國華%趙燕%張蕾%張雲%王樹惠%劉力
차창연%장국화%조연%장뢰%장운%왕수혜%류력
白细胞介素23受体(IL-23R)%克隆和表达%融合蛋白
白細胞介素23受體(IL-23R)%剋隆和錶達%融閤蛋白
백세포개소23수체(IL-23R)%극륭화표체%융합단백
目的:从外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人白细胞介素23受体(hIL-23R)编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达.方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,应用RT-PCR技术,以PBMC的cDNA为模版,扩增出hIL-23R的编码区(1890bp),将其克隆至pMD 19-T 载体,经酶切和测序鉴定后,亚克隆于pGEX-4T-1中构建原核表达载体pGEX-4T-1-hIL-23R,转化大肠杆菌感受态细胞BL-21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,经Western-blot对融合蛋白进行鉴定.结果:获得了hIL-23R编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,其相对分子质量Mr为97KDa.结论:成功构建hIL-23R原核表达载体并在大肠杆菌中表达hIL-23R融合蛋白.
目的:從外週血單箇覈細胞(PBMC)中剋隆人白細胞介素23受體(hIL-23R)編碼區序列,構建原覈錶達載體併在大腸桿菌中進行錶達.方法:分離人外週血單箇覈細胞(PBMC),提取PBMC的總RNA,應用RT-PCR技術,以PBMC的cDNA為模版,擴增齣hIL-23R的編碼區(1890bp),將其剋隆至pMD 19-T 載體,經酶切和測序鑒定後,亞剋隆于pGEX-4T-1中構建原覈錶達載體pGEX-4T-1-hIL-23R,轉化大腸桿菌感受態細胞BL-21(DE3),異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導後收集菌體蛋白,經Western-blot對融閤蛋白進行鑒定.結果:穫得瞭hIL-23R編碼區序列,構建原覈錶達載體併在大腸桿菌中錶達,錶達的融閤蛋白主要以包涵體形式存在,其相對分子質量Mr為97KDa.結論:成功構建hIL-23R原覈錶達載體併在大腸桿菌中錶達hIL-23R融閤蛋白.
목적:종외주혈단개핵세포(PBMC)중극륭인백세포개소23수체(hIL-23R)편마구서렬,구건원핵표체재체병재대장간균중진행표체.방법:분리인외주혈단개핵세포(PBMC),제취PBMC적총RNA,응용RT-PCR기술,이PBMC적cDNA위모판,확증출hIL-23R적편마구(1890bp),장기극륭지pMD 19-T 재체,경매절화측서감정후,아극륭우pGEX-4T-1중구건원핵표체재체pGEX-4T-1-hIL-23R,전화대장간균감수태세포BL-21(DE3),이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도후수집균체단백,경Western-blot대융합단백진행감정.결과:획득료hIL-23R편마구서렬,구건원핵표체재체병재대장간균중표체,표체적융합단백주요이포함체형식존재,기상대분자질량Mr위97KDa.결론:성공구건hIL-23R원핵표체재체병재대장간균중표체hIL-23R융합단백.
