农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2008年
4期
562-567
,共6页
徐树兰%童铁钢%白宇%辛九庆%王群%张维军%孙庆歌%吴东来
徐樹蘭%童鐵鋼%白宇%辛九慶%王群%張維軍%孫慶歌%吳東來
서수란%동철강%백우%신구경%왕군%장유군%손경가%오동래
赤羽病病毒%囊膜糖蛋白%表达纯化%ELISA
赤羽病病毒%囊膜糖蛋白%錶達純化%ELISA
적우병병독%낭막당단백%표체순화%ELISA
为获得赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)囊膜糖蛋白重组抗原作诊断应用研究,通过软件分析AKAV OBE-1株的囊膜糖蛋白G1的氨基酸序列,筛选出抗原性较好的基因片段G1-2作为目的片段,经RT-PCR扩增后,插入pMD18-T载体.经测序鉴定正确后,将该片段定向亚克隆于pET-28a(+)表达载体中,转化至BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达.经SDS-PAGE和Western blot分析,诱导表达产物以包涵体的形式存在,大小约为44 kD,且具有免疫学活性.亲和纯化后的融合蛋白浓度为2 mg/mL,纯度为92.6%.以该融合蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法.确定的抗原包被浓度为20μg/mL,血清最佳稀释度为1:200.交叉试验表明,该方法对牛常见的6种疾病阳性血清无交叉反应.应用该方法对病毒微量中和试验检测过的云南(77份)和内蒙(70份)牛血清样品进行了检测.以中和试验为参照,通过统计学处理,得出两地临界值分别为0.493和0.488,特异性为73%和86.9%,二者的符合率分别为80%和85.9%.
為穫得赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)囊膜糖蛋白重組抗原作診斷應用研究,通過軟件分析AKAV OBE-1株的囊膜糖蛋白G1的氨基痠序列,篩選齣抗原性較好的基因片段G1-2作為目的片段,經RT-PCR擴增後,插入pMD18-T載體.經測序鑒定正確後,將該片段定嚮亞剋隆于pET-28a(+)錶達載體中,轉化至BL21(DE3)感受態細胞中進行誘導錶達.經SDS-PAGE和Western blot分析,誘導錶達產物以包涵體的形式存在,大小約為44 kD,且具有免疫學活性.親和純化後的融閤蛋白濃度為2 mg/mL,純度為92.6%.以該融閤蛋白作為診斷抗原,建立瞭間接ELISA診斷方法.確定的抗原包被濃度為20μg/mL,血清最佳稀釋度為1:200.交扠試驗錶明,該方法對牛常見的6種疾病暘性血清無交扠反應.應用該方法對病毒微量中和試驗檢測過的雲南(77份)和內矇(70份)牛血清樣品進行瞭檢測.以中和試驗為參照,通過統計學處理,得齣兩地臨界值分彆為0.493和0.488,特異性為73%和86.9%,二者的符閤率分彆為80%和85.9%.
위획득적우병병독(Akabane virus,AKAV)낭막당단백중조항원작진단응용연구,통과연건분석AKAV OBE-1주적낭막당단백G1적안기산서렬,사선출항원성교호적기인편단G1-2작위목적편단,경RT-PCR확증후,삽입pMD18-T재체.경측서감정정학후,장해편단정향아극륭우pET-28a(+)표체재체중,전화지BL21(DE3)감수태세포중진행유도표체.경SDS-PAGE화Western blot분석,유도표체산물이포함체적형식존재,대소약위44 kD,차구유면역학활성.친화순화후적융합단백농도위2 mg/mL,순도위92.6%.이해융합단백작위진단항원,건립료간접ELISA진단방법.학정적항원포피농도위20μg/mL,혈청최가희석도위1:200.교차시험표명,해방법대우상견적6충질병양성혈청무교차반응.응용해방법대병독미량중화시험검측과적운남(77빈)화내몽(70빈)우혈청양품진행료검측.이중화시험위삼조,통과통계학처리,득출량지림계치분별위0.493화0.488,특이성위73%화86.9%,이자적부합솔분별위80%화85.9%.
