CAJ | 학술논문

目的:研究人骨髓来源的间充质干细胞(human bone marrow derived mesenchymal stem cells,hBM-MSCs)在肝细胞生长因子(HGF)、成纤维细胞生长因子 -4(FGF-4)、抑瘤素M(OSM)诱导下,体外向肝样细胞的诱导分化.方法:通过密度梯度离心和贴壁培养法获得hBM-MSCs,分离的hBM -MSCs扩增传至第6代,流式细胞仪检测hBM-MSCs表面CD34、CD45、CD105、CD166表达.第6代hBM -MSCs生长达100%融合时采用两步法对hBM-MSCs进行诱导分化.第1～第14天采用IMDM诱导培养基(含2% FCS、20 ng/mL HGF、20 ng/mL FGF-4),第15～第21天在上述培养基中加OSM(10 ng/mL),促进诱导细胞的成熟,同时收集第0、第7、第14、第21天培养上清液标本,ELISA法测ALB浓度.诱导培养21 d后采用RT-PCR、免疫荧光技术检测诱导后肝细胞特异标志CK18、ALB的表达,PAS染色检测诱导MSCs糖原储存.结果:传至第6代的hBM-MSCs CD34、CD45表达阴性,CD105、CD166表达阳性.在细胞因子的作用下,经过21 d的体外培养,hBM-MSCs形态发生变化,由长梭形变为多边形、类圆形,并具有肝细胞特异的表型和功能.RT -PCR可检测到CK18、ALB表达,免疫荧光可检测到诱导后细胞内CK18、ALB,培养上清中有ALB的分泌,且诱导后的肝样细胞内有糖原储存.结论:hBM-MSCs体外能转化为具有肝功能的肝样细胞.
목적:연구인골수래원적간충질간세포(human bone marrow derived mesenchymal stem cells,hBM-MSCs)재간세포생장인자(HGF)、성섬유세포생장인자 -4(FGF-4)、억류소M(OSM)유도하,체외향간양세포적유도분화.방법:통과밀도제도리심화첩벽배양법획득hBM-MSCs,분리적hBM -MSCs확증전지제6대,류식세포의검측hBM-MSCs표면CD34、CD45、CD105、CD166표체.제6대hBM -MSCs생장체100%융합시채용량보법대hBM-MSCs진행유도분화.제1～제14천채용IMDM유도배양기(함2% FCS、20 ng/mL HGF、20 ng/mL FGF-4),제15～제21천재상술배양기중가OSM(10 ng/mL),촉진유도세포적성숙,동시수집제0、제7、제14、제21천배양상청액표본,ELISA법측ALB농도.유도배양21 d후채용RT-PCR、면역형광기술검측유도후간세포특이표지CK18、ALB적표체,PAS염색검측유도MSCs당원저존.결과:전지제6대적hBM-MSCs CD34、CD45표체음성,CD105、CD166표체양성.재세포인자적작용하,경과21 d적체외배양,hBM-MSCs형태발생변화,유장사형변위다변형、류원형,병구유간세포특이적표형화공능.RT -PCR가검측도CK18、ALB표체,면역형광가검측도유도후세포내CK18、ALB,배양상청중유ALB적분비,차유도후적간양세포내유당원저존.결론:hBM-MSCs체외능전화위구유간공능적간양세포.