动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2010年
z1期
5-9
,共5页
王晶钰%张三东%刘红彦%李河林%程媛媛%李宇立%战美娜
王晶鈺%張三東%劉紅彥%李河林%程媛媛%李宇立%戰美娜
왕정옥%장삼동%류홍언%리하림%정원원%리우립%전미나
布鲁菌%外膜蛋白基因%多重PCR%检测
佈魯菌%外膜蛋白基因%多重PCR%檢測
포로균%외막단백기인%다중PCR%검측
根据GenBank中登录的布鲁菌(Brucella)omp31、bp26、omp10外膜蛋白基因序列,针对同一种病原,各设计合成了一对特异性引物,通过优化引物浓度组合,建立了检测布鲁菌 472 bp、290 bp、162 bp片段的多重PCR快速检测方法.通过对该方法的特异性、敏感性和重复性试验,结果显示,该方法从布鲁菌标准菌株中扩增出了特异性的目的片段,而对大肠埃希菌等细菌的扩增结果均为阴性.经过对10倍倍比稀释的模板进行检测,多重PCR的敏感度为最低可检出1.1×10-3ng的DNA,在感染布鲁菌病奶牛乳汁模拟标本中最低可检出细菌数为80 cfu/mL.不同人员用该方法重复检测,结果均一致,表明重复性好.应用该方法对88份临床疑似布鲁菌感染的奶牛乳样进行了检测,结果检出17份阳性,阳性检出率约为19.3%.检测结果表明,该方法具有特异、敏感、重复性好等优点,可用于奶牛布鲁菌病的临床检测及流行病学监测等.
根據GenBank中登錄的佈魯菌(Brucella)omp31、bp26、omp10外膜蛋白基因序列,針對同一種病原,各設計閤成瞭一對特異性引物,通過優化引物濃度組閤,建立瞭檢測佈魯菌 472 bp、290 bp、162 bp片段的多重PCR快速檢測方法.通過對該方法的特異性、敏感性和重複性試驗,結果顯示,該方法從佈魯菌標準菌株中擴增齣瞭特異性的目的片段,而對大腸埃希菌等細菌的擴增結果均為陰性.經過對10倍倍比稀釋的模闆進行檢測,多重PCR的敏感度為最低可檢齣1.1×10-3ng的DNA,在感染佈魯菌病奶牛乳汁模擬標本中最低可檢齣細菌數為80 cfu/mL.不同人員用該方法重複檢測,結果均一緻,錶明重複性好.應用該方法對88份臨床疑似佈魯菌感染的奶牛乳樣進行瞭檢測,結果檢齣17份暘性,暘性檢齣率約為19.3%.檢測結果錶明,該方法具有特異、敏感、重複性好等優點,可用于奶牛佈魯菌病的臨床檢測及流行病學鑑測等.
근거GenBank중등록적포로균(Brucella)omp31、bp26、omp10외막단백기인서렬,침대동일충병원,각설계합성료일대특이성인물,통과우화인물농도조합,건립료검측포로균 472 bp、290 bp、162 bp편단적다중PCR쾌속검측방법.통과대해방법적특이성、민감성화중복성시험,결과현시,해방법종포로균표준균주중확증출료특이성적목적편단,이대대장애희균등세균적확증결과균위음성.경과대10배배비희석적모판진행검측,다중PCR적민감도위최저가검출1.1×10-3ng적DNA,재감염포로균병내우유즙모의표본중최저가검출세균수위80 cfu/mL.불동인원용해방법중복검측,결과균일치,표명중복성호.응용해방법대88빈림상의사포로균감염적내우유양진행료검측,결과검출17빈양성,양성검출솔약위19.3%.검측결과표명,해방법구유특이、민감、중복성호등우점,가용우내우포로균병적림상검측급류행병학감측등.