汕头大学医学院学报
汕頭大學醫學院學報
산두대학의학원학보
JOURNAL OF SHANTOU UNIVERSITY MEDICAL COLLEGE
2011年
4期
196-199
,共4页
纪影畅%蔡湘娜%林常敏%李宇
紀影暢%蔡湘娜%林常敏%李宇
기영창%채상나%림상민%리우
Wnt10b基因%载体%COS-7细胞%基因表达
Wnt10b基因%載體%COS-7細胞%基因錶達
Wnt10b기인%재체%COS-7세포%기인표체
目的:利用基因工程技术构建人Wnt10b基因的pEGFP-N1-Wnt10b真核表达载体,观察其在COS-7细胞中的表达.方法:以pUC19-Wnt10b为模板,PCR扩增人Wnt10b基因的cDNA编码区序列,扩增产物和pEGFP-N1载体双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建pEGFP-N1-Wnt10b,酶切和测序鉴定该载体;Lipofectamine TM2000将该载体转染入COS-7中,Western blot和免疫细胞化学检测COS-7 Wnt10b蛋白表达.结果:PCR扩增出的人Wnt10b基因cDNA正确克隆到pEGFP-N1载体,成功构建了pEGFP-N1-Wnt10b;将其转染入COS-7,COS-7 Wnt10b蛋白表达明显增高.结论:成功构建了人pEGFP-N1-Wnt10b,这为进一步研究Wnt10b基因功能奠定了前期基础.
目的:利用基因工程技術構建人Wnt10b基因的pEGFP-N1-Wnt10b真覈錶達載體,觀察其在COS-7細胞中的錶達.方法:以pUC19-Wnt10b為模闆,PCR擴增人Wnt10b基因的cDNA編碼區序列,擴增產物和pEGFP-N1載體雙酶切,T4 DNA連接酶連接,構建pEGFP-N1-Wnt10b,酶切和測序鑒定該載體;Lipofectamine TM2000將該載體轉染入COS-7中,Western blot和免疫細胞化學檢測COS-7 Wnt10b蛋白錶達.結果:PCR擴增齣的人Wnt10b基因cDNA正確剋隆到pEGFP-N1載體,成功構建瞭pEGFP-N1-Wnt10b;將其轉染入COS-7,COS-7 Wnt10b蛋白錶達明顯增高.結論:成功構建瞭人pEGFP-N1-Wnt10b,這為進一步研究Wnt10b基因功能奠定瞭前期基礎.
목적:이용기인공정기술구건인Wnt10b기인적pEGFP-N1-Wnt10b진핵표체재체,관찰기재COS-7세포중적표체.방법:이pUC19-Wnt10b위모판,PCR확증인Wnt10b기인적cDNA편마구서렬,확증산물화pEGFP-N1재체쌍매절,T4 DNA련접매련접,구건pEGFP-N1-Wnt10b,매절화측서감정해재체;Lipofectamine TM2000장해재체전염입COS-7중,Western blot화면역세포화학검측COS-7 Wnt10b단백표체.결과:PCR확증출적인Wnt10b기인cDNA정학극륭도pEGFP-N1재체,성공구건료pEGFP-N1-Wnt10b;장기전염입COS-7,COS-7 Wnt10b단백표체명현증고.결론:성공구건료인pEGFP-N1-Wnt10b,저위진일보연구Wnt10b기인공능전정료전기기출.
