CAJ | 학술논문

从BL21(DE3)E.coli菌株中以PCR的方法扩增得到了与T7 RNA多聚酶(T7 RNA polymerase,T7pol)基因大小一致的DNA片断.将PCR产物纯化后直接克隆到pGEM-T载体中,经酶切鉴定和DNA序列分析表明克隆得到了正确的T7pol基因.将T7pol基因亚克隆入pET-28b(+)中,构建得到原核表达质粒pET28T7.该质粒的BL21(DE3)pLysS转化菌在IPTG的诱导下可表达约98 800的蛋白,这与T7pol的相对分子质量一致.将该质粒转化DH5α、JM109、HB101、BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS等5种不同的宿主菌,仅有转化T7pol酶活性受到抑制的宿主菌BL21(DE3)pLysS才能得到转化子,而其余4种T7 T7pol酶活性不受抑制的E.coli宿主菌不能得到转化子.pET28T7原核表达质粒这种仅能在T7pol酶活性受到抑制的宿主菌中才能存活的现象说明本试验所克隆的T7pol基因能正确表达出具有RNA转录酶活性的蛋白.
종BL21(DE3)E.coli균주중이PCR적방법확증득도료여T7 RNA다취매(T7 RNA polymerase,T7pol)기인대소일치적DNA편단.장PCR산물순화후직접극륭도pGEM-T재체중,경매절감정화DNA서렬분석표명극륭득도료정학적T7pol기인.장T7pol기인아극륭입pET-28b(+)중,구건득도원핵표체질립pET28T7.해질립적BL21(DE3)pLysS전화균재IPTG적유도하가표체약98 800적단백,저여T7pol적상대분자질량일치.장해질립전화DH5α、JM109、HB101、BL21(DE3)화BL21(DE3)pLysS등5충불동적숙주균,부유전화T7pol매활성수도억제적숙주균BL21(DE3)pLysS재능득도전화자,이기여4충T7 T7pol매활성불수억제적E.coli숙주균불능득도전화자.pET28T7원핵표체질립저충부능재T7pol매활성수도억제적숙주균중재능존활적현상설명본시험소극륭적T7pol기인능정학표체출구유RNA전록매활성적단백.