CAJ | 학술논문

目的观察咖啡因(caffeine)对苯妥英(diphenylhydantoin, DPH)100 μmol ·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granular neurons, CGNs)存活率的影响,并探讨其作用机制.方法体外培养8 d的CGNs,同时给予100 μmol·L-1 苯妥英和1.25～20 mmol·L-1咖啡因,48 h后行凋亡分析;采用dantrolene(20 μmol·L-1)、2APB(50 μmol·L-1)、nifedipine(100 μmol·L-1)和nimodipine(100 μmol·L-1)、MK801(4 μmol·L-1)、KN93(1 μmol·L-1)以及MEK1抑制剂PD98059(50 μmol·L-1)分别预先孵育30 min,再与10 mmol·L-1咖啡因和100 μmol·L-1苯妥英共孵育48 h,测定CGNs存活率,观察咖啡因的作用与[Ca2+]I的关系;Western blot法检测咖啡因对磷酸化c-Jun和磷酸化ERK水平的影响.结果① 1.25～20 mmol·L-1咖啡因可浓度依赖性抑制100 μmol·L-1 苯妥英引起的CGNs凋亡,显著提高CGNs存活率;② dantrolene、2APB、nifedipine和nimodipine、KN93、MK801和PD98059均不能取消10 mmol·L-1咖啡因对100 μmol·L-1 苯妥英引起的CGNs凋亡的保护作用.③咖啡因可明显抑制苯妥英诱导CGNs中c-Jun磷酸化水平的升高,但不影响被苯妥英抑制的ERK的活性.结论一定浓度的咖啡因可保护苯妥英诱导的CGNs凋亡,这种保护作用可能与咖啡因的胞内钙动员及促进钙内流无关,亦非ERK依赖性途径,而可能通过抑制c-Jun活性起作用.
목적관찰가배인(caffeine)대분타영(diphenylhydantoin, DPH)100 μmol ·L-1처리적대서소뇌과립신경원(cerebellar granular neurons, CGNs)존활솔적영향,병탐토기작용궤제.방법체외배양8 d적CGNs,동시급여100 μmol·L-1 분타영화1.25～20 mmol·L-1가배인,48 h후행조망분석;채용dantrolene(20 μmol·L-1)、2APB(50 μmol·L-1)、nifedipine(100 μmol·L-1)화nimodipine(100 μmol·L-1)、MK801(4 μmol·L-1)、KN93(1 μmol·L-1)이급MEK1억제제PD98059(50 μmol·L-1)분별예선부육30 min,재여10 mmol·L-1가배인화100 μmol·L-1분타영공부육48 h,측정CGNs존활솔,관찰가배인적작용여[Ca2+]I적관계;Western blot법검측가배인대린산화c-Jun화린산화ERK수평적영향.결과① 1.25～20 mmol·L-1가배인가농도의뢰성억제100 μmol·L-1 분타영인기적CGNs조망,현저제고CGNs존활솔;② dantrolene、2APB、nifedipine화nimodipine、KN93、MK801화PD98059균불능취소10 mmol·L-1가배인대100 μmol·L-1 분타영인기적CGNs조망적보호작용.③가배인가명현억제분타영유도CGNs중c-Jun린산화수평적승고,단불영향피분타영억제적ERK적활성.결론일정농도적가배인가보호분타영유도적CGNs조망,저충보호작용가능여가배인적포내개동원급촉진개내류무관,역비ERK의뢰성도경,이가능통과억제c-Jun활성기작용.