解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2008年
7期
823-825
,共3页
何勇虹%李宜成%彭志红%汪荣泉
何勇虹%李宜成%彭誌紅%汪榮泉
하용홍%리의성%팽지홍%왕영천
黏蛋白类%蛋白酶切%糖基化
黏蛋白類%蛋白酶切%糖基化
점단백류%단백매절%당기화
目的 探讨大鼠黏蛋白3(rMuc3)羧基端蛋白酶切反应和羧基端内N-糖苷型糖链与细胞膜定位的关系.方法 利用脂质体将包含rMuc3羧基端的3个真核表达载体p20、p20t和p20s/a导人COS-1细胞,并采用N-糖苷型糖链合成抑制剂衣霉素处理转染后的COS-1细胞,抑制其表达蛋白质的N型糖链合成.采用免疫荧光定位法,用抗V5抗体和抗Myc抗体检测Muc3蛋白的表达.结果 在甲醇固定的COS-1细胞,细胞核周和细胞表面均能检测到完整的Muc3羧基端p20表达产物;在未经甲醇固定的COS-1细胞,免疫荧光仅限于细胞表面.缺失的rMuc3羧基端的p20t表达产物仪能在细胞核周检测到.Muc3羧基端建立的蛋白酶切阴性突变体p20s/a与p20转染细胞的荧光分布相近.衣霉素抑制糖链合成后不影响膜定位.结论 Muc3羧基末端蛋白酶切的阻断及N-糖基化的抑制不能影响Muc3的细胞膜定位,影响其定位的因素主要是SEA组件靠近羧基端的区域,包括该分子的跨膜区和胞质内区域.
目的 探討大鼠黏蛋白3(rMuc3)羧基耑蛋白酶切反應和羧基耑內N-糖苷型糖鏈與細胞膜定位的關繫.方法 利用脂質體將包含rMuc3羧基耑的3箇真覈錶達載體p20、p20t和p20s/a導人COS-1細胞,併採用N-糖苷型糖鏈閤成抑製劑衣黴素處理轉染後的COS-1細胞,抑製其錶達蛋白質的N型糖鏈閤成.採用免疫熒光定位法,用抗V5抗體和抗Myc抗體檢測Muc3蛋白的錶達.結果 在甲醇固定的COS-1細胞,細胞覈週和細胞錶麵均能檢測到完整的Muc3羧基耑p20錶達產物;在未經甲醇固定的COS-1細胞,免疫熒光僅限于細胞錶麵.缺失的rMuc3羧基耑的p20t錶達產物儀能在細胞覈週檢測到.Muc3羧基耑建立的蛋白酶切陰性突變體p20s/a與p20轉染細胞的熒光分佈相近.衣黴素抑製糖鏈閤成後不影響膜定位.結論 Muc3羧基末耑蛋白酶切的阻斷及N-糖基化的抑製不能影響Muc3的細胞膜定位,影響其定位的因素主要是SEA組件靠近羧基耑的區域,包括該分子的跨膜區和胞質內區域.
목적 탐토대서점단백3(rMuc3)최기단단백매절반응화최기단내N-당감형당련여세포막정위적관계.방법 이용지질체장포함rMuc3최기단적3개진핵표체재체p20、p20t화p20s/a도인COS-1세포,병채용N-당감형당련합성억제제의매소처리전염후적COS-1세포,억제기표체단백질적N형당련합성.채용면역형광정위법,용항V5항체화항Myc항체검측Muc3단백적표체.결과 재갑순고정적COS-1세포,세포핵주화세포표면균능검측도완정적Muc3최기단p20표체산물;재미경갑순고정적COS-1세포,면역형광부한우세포표면.결실적rMuc3최기단적p20t표체산물의능재세포핵주검측도.Muc3최기단건립적단백매절음성돌변체p20s/a여p20전염세포적형광분포상근.의매소억제당련합성후불영향막정위.결론 Muc3최기말단단백매절적조단급N-당기화적억제불능영향Muc3적세포막정위,영향기정위적인소주요시SEA조건고근최기단적구역,포괄해분자적과막구화포질내구역.
