农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2009年
3期
375-380
,共6页
张颖%侯化鹏%王海瑞%白莉雅%杨利国
張穎%侯化鵬%王海瑞%白莉雅%楊利國
장영%후화붕%왕해서%백리아%양리국
生长抑素%噬菌体展示%单链抗体
生長抑素%噬菌體展示%單鏈抗體
생장억소%서균체전시%단련항체
应用噬菌体表面展示技术,从生长抑素免疫的BALB/C小鼠(Mus musculus)脾脏中提取总RNA,用RT-PCR技术反转录成cDNA,通过PCR扩增出抗体重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,再用编码(G1y4Ser)3的Linker在体外将VH和VL连接成单链抗体(ScFv)基因,克隆到噬菌粒载体pCANTABSE中,电转化至感受态的大肠杆菌(Escherichia coli)TG1,经辅助噬菌体M13K07超感染,形成噬菌体单链抗体库.经检测,噬菌体的滴度为3.5x1011pfu,有效库容为9.3×107.随机挑取20个克隆,PCR方法测定文库重组率为85%,小规模选取阳性克隆测序分析表明,均含有ScFv基闪的完整序列,基本满足建库的要求.
應用噬菌體錶麵展示技術,從生長抑素免疫的BALB/C小鼠(Mus musculus)脾髒中提取總RNA,用RT-PCR技術反轉錄成cDNA,通過PCR擴增齣抗體重鏈可變區VH基因和輕鏈可變區VL基因,再用編碼(G1y4Ser)3的Linker在體外將VH和VL連接成單鏈抗體(ScFv)基因,剋隆到噬菌粒載體pCANTABSE中,電轉化至感受態的大腸桿菌(Escherichia coli)TG1,經輔助噬菌體M13K07超感染,形成噬菌體單鏈抗體庫.經檢測,噬菌體的滴度為3.5x1011pfu,有效庫容為9.3×107.隨機挑取20箇剋隆,PCR方法測定文庫重組率為85%,小規模選取暘性剋隆測序分析錶明,均含有ScFv基閃的完整序列,基本滿足建庫的要求.
응용서균체표면전시기술,종생장억소면역적BALB/C소서(Mus musculus)비장중제취총RNA,용RT-PCR기술반전록성cDNA,통과PCR확증출항체중련가변구VH기인화경련가변구VL기인,재용편마(G1y4Ser)3적Linker재체외장VH화VL련접성단련항체(ScFv)기인,극륭도서균립재체pCANTABSE중,전전화지감수태적대장간균(Escherichia coli)TG1,경보조서균체M13K07초감염,형성서균체단련항체고.경검측,서균체적적도위3.5x1011pfu,유효고용위9.3×107.수궤도취20개극륭,PCR방법측정문고중조솔위85%,소규모선취양성극륭측서분석표명,균함유ScFv기섬적완정서렬,기본만족건고적요구.
