CAJ | 학술논문

目的:探讨瞬时受体电位通道蛋白3(TRPC3)在缺氧诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用.方法:采用HUVECs细胞株, 复苏传代后计数稀释,接种于6孔培养板中, 实验组分为常氧对照组(5%CO2+95%空气)和缺氧组(1%O2+5%CO2+94%N2),处理24 h后,应用实时荧光定量RT-PCR法及WesternBlot法检测TRPC3 mRNA和蛋白水平的表达变化.构建靶向TRPC3基因的siRNA和无关序列质粒表达载体, 分别转染至HUVECs,缺氧处理后再用四甲基偶氮唑盐比色法(Methods the tetrazolium,MTT)检测各组细胞存活率, Hoechest33342 荧光染色观察细胞凋亡.结果:缺氧处理24 h, HUVECs中TRPC3 mRNA和蛋白表达明显升高,细胞存活率为67.4%, 与常氧对照组有显著性差异( P＜0.05) ;缺氧+TRPC3干扰组细胞存活率为92.7%, 与缺氧组有显著性差异( P＜0.05);缺氧+TRPC3假干扰组与缺氧组无显著性差异( P＞0.05).荧光显微镜下观察, 常氧对照组胞核均匀蓝染;缺氧处理组和缺氧+TRPC3假干扰组胞核明显固缩、凝聚, 可见凋亡小体; 而缺氧+TRPC3干扰组胞核均匀蓝染.结论: TRPC3参与缺氧诱导HUVECs凋亡.
목적:탐토순시수체전위통도단백3(TRPC3)재결양유도인제정맥혈관내피세포(HUVECs)조망중적작용.방법:채용HUVECs세포주, 복소전대후계수희석,접충우6공배양판중, 실험조분위상양대조조(5%CO2+95%공기)화결양조(1%O2+5%CO2+94%N2),처리24 h후,응용실시형광정량RT-PCR법급WesternBlot법검측TRPC3 mRNA화단백수평적표체변화.구건파향TRPC3기인적siRNA화무관서렬질립표체재체, 분별전염지HUVECs,결양처리후재용사갑기우담서염비색법(Methods the tetrazolium,MTT)검측각조세포존활솔, Hoechest33342 형광염색관찰세포조망.결과:결양처리24 h, HUVECs중TRPC3 mRNA화단백표체명현승고,세포존활솔위67.4%, 여상양대조조유현저성차이( P＜0.05) ;결양+TRPC3간우조세포존활솔위92.7%, 여결양조유현저성차이( P＜0.05);결양+TRPC3가간우조여결양조무현저성차이( P＞0.05).형광현미경하관찰, 상양대조조포핵균균람염;결양처리조화결양+TRPC3가간우조포핵명현고축、응취, 가견조망소체; 이결양+TRPC3간우조포핵균균람염.결론: TRPC3삼여결양유도HUVECs조망.