世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2010年
8期
755-760
,共6页
姚永远%马立宪%赛林涛%邵丽华%关彦彦%王刚
姚永遠%馬立憲%賽林濤%邵麗華%關彥彥%王剛
요영원%마립헌%새림도%소려화%관언언%왕강
乙型肝炎病毒%细胞模型%细胞融合%感染
乙型肝炎病毒%細胞模型%細胞融閤%感染
을형간염병독%세포모형%세포융합%감염
目的:建立一新型细胞株,使该细胞株既能自然感染HBV又能传代培养,评价杂交细胞对HBV的自然感染能力.方法:分离培养未携带HBV的人原代肝细胞,与诱导突变的HepG2细胞进行融合得杂交细胞,经HAT培养基筛选,利用胰蛋白酶G显带技术鉴定所得细胞,用含HBV的慢性乙型肝炎患者血清感染杂交细胞(同时感染HepG2作为对照),巢式PCR检测感染后细胞内HBVDNA合成及分泌情况及有无HBV复制中间产物HBV cccDNA,间接免疫荧光检测感染后细胞内HBcAg的表达,电化学发光法检测感染后细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg.结果:成功建立人原代肝细胞与HepG2的杂交细胞,能体外传代培养,染色体核型分析示杂交细胞染色体众数为99条,证实为融合细胞,HBV感染后第4天起,杂交细胞内和培养上清中均能检测到HBV DNA,HBV感染后第3天起,杂交细胞内可以检测到HBV的复制中间产物HBV cccDNA,HBV感染后第4天起,杂交细胞胞质及部分胞核内HBcAg始终是阳性表达,间接免疫荧光染色呈胞质弥漫性着色,电化学发光法检测培养上清中HBsAg及HBeAg持续表达;而感染后的HepG2细胞检测结果均为阴性.结论:成功建立的兼具有人原代肝细胞和HepG2遗传特性的杂交细胞株可以被慢性乙型肝炎患者血清中的HBV病毒自然感染,可进一步用作研究HBV感染的体外细胞模型.
目的:建立一新型細胞株,使該細胞株既能自然感染HBV又能傳代培養,評價雜交細胞對HBV的自然感染能力.方法:分離培養未攜帶HBV的人原代肝細胞,與誘導突變的HepG2細胞進行融閤得雜交細胞,經HAT培養基篩選,利用胰蛋白酶G顯帶技術鑒定所得細胞,用含HBV的慢性乙型肝炎患者血清感染雜交細胞(同時感染HepG2作為對照),巢式PCR檢測感染後細胞內HBVDNA閤成及分泌情況及有無HBV複製中間產物HBV cccDNA,間接免疫熒光檢測感染後細胞內HBcAg的錶達,電化學髮光法檢測感染後細胞培養上清中的HBsAg和HBeAg.結果:成功建立人原代肝細胞與HepG2的雜交細胞,能體外傳代培養,染色體覈型分析示雜交細胞染色體衆數為99條,證實為融閤細胞,HBV感染後第4天起,雜交細胞內和培養上清中均能檢測到HBV DNA,HBV感染後第3天起,雜交細胞內可以檢測到HBV的複製中間產物HBV cccDNA,HBV感染後第4天起,雜交細胞胞質及部分胞覈內HBcAg始終是暘性錶達,間接免疫熒光染色呈胞質瀰漫性著色,電化學髮光法檢測培養上清中HBsAg及HBeAg持續錶達;而感染後的HepG2細胞檢測結果均為陰性.結論:成功建立的兼具有人原代肝細胞和HepG2遺傳特性的雜交細胞株可以被慢性乙型肝炎患者血清中的HBV病毒自然感染,可進一步用作研究HBV感染的體外細胞模型.
목적:건립일신형세포주,사해세포주기능자연감염HBV우능전대배양,평개잡교세포대HBV적자연감염능력.방법:분리배양미휴대HBV적인원대간세포,여유도돌변적HepG2세포진행융합득잡교세포,경HAT배양기사선,이용이단백매G현대기술감정소득세포,용함HBV적만성을형간염환자혈청감염잡교세포(동시감염HepG2작위대조),소식PCR검측감염후세포내HBVDNA합성급분비정황급유무HBV복제중간산물HBV cccDNA,간접면역형광검측감염후세포내HBcAg적표체,전화학발광법검측감염후세포배양상청중적HBsAg화HBeAg.결과:성공건립인원대간세포여HepG2적잡교세포,능체외전대배양,염색체핵형분석시잡교세포염색체음수위99조,증실위융합세포,HBV감염후제4천기,잡교세포내화배양상청중균능검측도HBV DNA,HBV감염후제3천기,잡교세포내가이검측도HBV적복제중간산물HBV cccDNA,HBV감염후제4천기,잡교세포포질급부분포핵내HBcAg시종시양성표체,간접면역형광염색정포질미만성착색,전화학발광법검측배양상청중HBsAg급HBeAg지속표체;이감염후적HepG2세포검측결과균위음성.결론:성공건립적겸구유인원대간세포화HepG2유전특성적잡교세포주가이피만성을형간염환자혈청중적HBV병독자연감염,가진일보용작연구HBV감염적체외세포모형.
