南方水产
南方水產
남방수산
SOUTH CHINA FISHERIES SCIENCE
2010年
4期
56-62
,共7页
柯浩%刘振兴%林敏%孟轩%陈棠堂
柯浩%劉振興%林敏%孟軒%陳棠堂
가호%류진흥%림민%맹헌%진당당
锦鲤疱疹病毒%囊膜蛋白%B细胞表位%原核表达
錦鯉皰疹病毒%囊膜蛋白%B細胞錶位%原覈錶達
금리포진병독%낭막단백%B세포표위%원핵표체
从感染锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)的锦鲤(Cyprinus carpio koi)肾脏组织中提取DNA,通过PCR扩增了KHV ORF59基因.该基因全长411 bp,所编码的蛋白包含136个氨基酸,分子量14.3 kDa,等电点(PI) 6.91,有12 个潜在的O糖基化位点.此研究克隆的KHV ORF59基因第130位碱基由G突变为A,使其编码的第44位氨基酸由Ala突变为Thr.采用DNA Star 程序,在综合分析二级结构柔性区、蛋白的亲水性、表面可能性和抗原性指数的基础上,预测了KHV ORF59蛋白主要B细胞表位,并将其区段的编码序列与KHV ORF59 完整编码序列分别克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET32a-ORF59S和pET32a-ORF59C,转入大肠杆菌Rosetta菌株,IPTG诱导表达.SDS-PAGE及Western Blot分析显示,pET32a-ORF59S可以高效表达,表达的截短KHV ORF59蛋白主要以可溶性形式存在,采用His Bind Resin填料,层析纯化了该截短蛋白.
從感染錦鯉皰疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)的錦鯉(Cyprinus carpio koi)腎髒組織中提取DNA,通過PCR擴增瞭KHV ORF59基因.該基因全長411 bp,所編碼的蛋白包含136箇氨基痠,分子量14.3 kDa,等電點(PI) 6.91,有12 箇潛在的O糖基化位點.此研究剋隆的KHV ORF59基因第130位堿基由G突變為A,使其編碼的第44位氨基痠由Ala突變為Thr.採用DNA Star 程序,在綜閤分析二級結構柔性區、蛋白的親水性、錶麵可能性和抗原性指數的基礎上,預測瞭KHV ORF59蛋白主要B細胞錶位,併將其區段的編碼序列與KHV ORF59 完整編碼序列分彆剋隆入原覈錶達載體pET-32a(+),構建重組質粒pET32a-ORF59S和pET32a-ORF59C,轉入大腸桿菌Rosetta菌株,IPTG誘導錶達.SDS-PAGE及Western Blot分析顯示,pET32a-ORF59S可以高效錶達,錶達的截短KHV ORF59蛋白主要以可溶性形式存在,採用His Bind Resin填料,層析純化瞭該截短蛋白.
종감염금리포진병독(Koi herpesvirus,KHV)적금리(Cyprinus carpio koi)신장조직중제취DNA,통과PCR확증료KHV ORF59기인.해기인전장411 bp,소편마적단백포함136개안기산,분자량14.3 kDa,등전점(PI) 6.91,유12 개잠재적O당기화위점.차연구극륭적KHV ORF59기인제130위감기유G돌변위A,사기편마적제44위안기산유Ala돌변위Thr.채용DNA Star 정서,재종합분석이급결구유성구、단백적친수성、표면가능성화항원성지수적기출상,예측료KHV ORF59단백주요B세포표위,병장기구단적편마서렬여KHV ORF59 완정편마서렬분별극륭입원핵표체재체pET-32a(+),구건중조질립pET32a-ORF59S화pET32a-ORF59C,전입대장간균Rosetta균주,IPTG유도표체.SDS-PAGE급Western Blot분석현시,pET32a-ORF59S가이고효표체,표체적절단KHV ORF59단백주요이가용성형식존재,채용His Bind Resin전료,층석순화료해절단단백.
