猪α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达
저α간우소재필적효모중적분비표체
Secreting Expression of Porcine Interferon-Alpha in Pichia pastoris
  • 万方数据
    湖北农业科学 호북농업과학

    2010年 11期 2665-2668 ,共4页

    梁望旺%周丹娜%田永祥%伍锐%杨克礼%刘泽文%段正赢%邓均华%郭锐%袁秋云%徐涤平

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    저α간우소%필적효모%분비표체
    利用PCR技术从长白猪全血基因组DNA中扩增出猪α干扰素的成熟肽(mPoIFN-α)基因,并将其亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母(Pichia pastoris)-大肠杆菌(Escherichia coil)穿梭质粒pPIC9K栽体中,构建分泌型重组表达栽体pPIC9K-mPoIFN-α.将Sal Ⅰ线性化的pPIC9K-mPoIFN-α电转化毕赤酵母GS115株(组氨酸缺陷型),使重组表达栽体与酵母染色体发生同源重组.转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后,得到的阳性菌株再以G418抗性梯度法筛选多拷贝重组子.该多拷贝菌株经1%甲醇诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,结果表明,猪α干扰素在毕赤酵母中成功地获得了分泌表达,并具有免疫活性,表达产物约为19kD,这为进一步研究猪α干扰素的功能奠定了基础.
    이용PCR기술종장백저전혈기인조DNA중확증출저α간우소적성숙태(mPoIFN-α)기인,병장기아극륭도함분비신호태서렬적필적효모(Pichia pastoris)-대장간균(Escherichia coil)천사질립pPIC9K재체중,구건분비형중조표체재체pPIC9K-mPoIFN-α.장Sal Ⅰ선성화적pPIC9K-mPoIFN-α전전화필적효모GS115주(조안산결함형),사중조표체재체여효모염색체발생동원중조.전화자경MD평판사선화PCR감정후,득도적양성균주재이G418항성제도법사선다고패중조자.해다고패균주경1%갑순유도표체,표체산물경SDS-PAGE화Western-blot검측,결과표명,저α간우소재필적효모중성공지획득료분비표체,병구유면역활성,표체산물약위19kD,저위진일보연구저α간우소적공능전정료기출.
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