CAJ | 학술논문

目的研究siRNA干扰β-Catenin表达、阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞(HSC)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法将化学合成siRNA β-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA及蛋白质,收集培养上清液,应用反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测细胞β-Catenin表达；Western blot法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况；细胞免疫荧光法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达与定位；酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量.结果转染siRNA的HSC-T6细胞β-Catenin基因及蛋白表达水平明显下调,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著下调,免疫细胞化学提示转染siRNA β-Catenin后的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均较对照组明显减弱；48 h和72 h时培养上清液中Ⅰ型胶原表达水平显著减少,分别比阴性对照下降(23.68±7.96)％和(38.42±6.58)％(F= 18.26,P＜0.01；F= 26.38,P＜0.01),Ⅲ型胶原含量于72 h时降低(39.68±4.92)％ (F= 37.68,P＜0.0t).结论 siRNAβ-Catenin能高效抑制HSC-T6细胞β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路,从而抑制HSC-T6细胞增殖,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力.
목적 연구siRNA간우β-Catenin표체、조단Wnt/β-Catenin신호통로대간성상세포(HSC)Ⅰ、Ⅲ형효원표체적영향.방법 장화학합성siRNA β-Catenin이Lipofectamine포과,전염HSC-T6세포,설음성대조화공백대조,추제세포총RNA급단백질,수집배양상청액,응용반전록-취합매련반응화Western blot법검측세포β-Catenin표체；Western blot법검측세포Ⅰ、Ⅲ형효원표체정황；세포면역형광법검측Ⅰ、Ⅲ형효원표체여정위；매련면역흡부법검측배양상청액중Ⅰ、Ⅲ형효원함량.결과 전염siRNA적HSC-T6세포β-Catenin기인급단백표체수평명현하조,Ⅰ、Ⅲ형효원표체현저하조,면역세포화학제시전염siRNA β-Catenin후적Ⅰ、Ⅲ형효원표체균교대조조명현감약；48 h화72 h시배양상청액중Ⅰ형효원표체수평현저감소,분별비음성대조하강(23.68±7.96)％화(38.42±6.58)％(F= 18.26,P＜0.01；F= 26.38,P＜0.01),Ⅲ형효원함량우72 h시강저(39.68±4.92)％ (F= 37.68,P＜0.0t).결론 siRNAβ-Catenin능고효억제HSC-T6세포β-Catenin표체,조단Wnt/β-Catenin신호통로,종이억제HSC-T6세포증식,현저감소Ⅰ、Ⅲ형효원적합성화분비,구유예방급치료간섬유화적잠력.