中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2011年
11期
966-969
,共4页
储毅%刘全华%华丽%朱亚菊%高苗苗%鲍一笑
儲毅%劉全華%華麗%硃亞菊%高苗苗%鮑一笑
저의%류전화%화려%주아국%고묘묘%포일소
人白介素13%表达质粒%构建%哺乳细胞
人白介素13%錶達質粒%構建%哺乳細胞
인백개소13%표체질립%구건%포유세포
目的:构建野生型及突变型人IL-13(hIL-13)哺乳细胞表达质粒.方法:采用融合PCR扩增人生长激素(hGH)-hIL13融合蛋白编码序列.PCR产物和pcDNA3.1表达载体经Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ双酶切处理后,将PCR产物定向插入pcDNA3.1真核表达载体中,构建质粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g.将其转化到DH5α感受态细胞内进行扩增,阳性克隆鉴定,质粒抽提,进行测序验证.结果:重组质粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g经测序验证,hGH-hIL13融合蛋白编码序列与实验设计一致,且已与pcDNA3.1(+)真核表达载体正确重组.结论:成功构建了哺乳细胞表达质粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g,为后续野生型及突变型hIL-13哺乳细胞的重组表达奠定了基础.
目的:構建野生型及突變型人IL-13(hIL-13)哺乳細胞錶達質粒.方法:採用融閤PCR擴增人生長激素(hGH)-hIL13融閤蛋白編碼序列.PCR產物和pcDNA3.1錶達載體經Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ雙酶切處理後,將PCR產物定嚮插入pcDNA3.1真覈錶達載體中,構建質粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g.將其轉化到DH5α感受態細胞內進行擴增,暘性剋隆鑒定,質粒抽提,進行測序驗證.結果:重組質粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g經測序驗證,hGH-hIL13融閤蛋白編碼序列與實驗設計一緻,且已與pcDNA3.1(+)真覈錶達載體正確重組.結論:成功構建瞭哺乳細胞錶達質粒pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a和pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g,為後續野生型及突變型hIL-13哺乳細胞的重組錶達奠定瞭基礎.
목적:구건야생형급돌변형인IL-13(hIL-13)포유세포표체질립.방법:채용융합PCR확증인생장격소(hGH)-hIL13융합단백편마서렬.PCR산물화pcDNA3.1표체재체경Hind Ⅲ화EcoR Ⅰ쌍매절처리후,장PCR산물정향삽입pcDNA3.1진핵표체재체중,구건질립pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a화pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g.장기전화도DH5α감수태세포내진행확증,양성극륭감정,질립추제,진행측서험증.결과:중조질립pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a화pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g경측서험증,hGH-hIL13융합단백편마서렬여실험설계일치,차이여pcDNA3.1(+)진핵표체재체정학중조.결론:성공구건료포유세포표체질립pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-a화pcDNA3.1(+)/hGH-hIL13-g,위후속야생형급돌변형hIL-13포유세포적중조표체전정료기출.
