高技术通讯
高技術通訊
고기술통신
HIGH TECHNOLOGY LETTERS
2005年
5期
62-66
,共5页
王玉梅%张学成%周一江%隋正红%茅云翔
王玉梅%張學成%週一江%隋正紅%茅雲翔
왕옥매%장학성%주일강%수정홍%모운상
降钙素%藻蓝蛋白β亚基%融合蛋白%降血钙活性
降鈣素%藻藍蛋白β亞基%融閤蛋白%降血鈣活性
강개소%조람단백β아기%융합단백%강혈개활성
将人和鲑鱼嵌合型降钙素基因与藻蓝蛋白的β亚基基因相连,插入融合表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL21.融合蛋白cpcB-CT基因在IPTG诱导下获得高效表达.超声破碎后,经SDS-PAGE分析,在48kD处有新增条,灰度扫描测定,过表达蛋白量占50%～60%,85%为包涵体.包涵体经变性、复性,过Glutathion-Sepharose-4B亲和吸附柱,获含有GST的融合蛋白,该蛋白经凝血酶消化和截留分离,获得纯化的融合蛋白cpcB-CT.Western blotting分析表明,产物具有与合成人降钙素相似的抗原决定簇部分;ELISA-受体法和大鼠降血钙试验表明,其具有降血钙作用.提示该融合蛋白可能具有良好的应用前景.
將人和鮭魚嵌閤型降鈣素基因與藻藍蛋白的β亞基基因相連,插入融閤錶達載體pGEX-4T-3中,轉化大腸桿菌BL21.融閤蛋白cpcB-CT基因在IPTG誘導下穫得高效錶達.超聲破碎後,經SDS-PAGE分析,在48kD處有新增條,灰度掃描測定,過錶達蛋白量佔50%～60%,85%為包涵體.包涵體經變性、複性,過Glutathion-Sepharose-4B親和吸附柱,穫含有GST的融閤蛋白,該蛋白經凝血酶消化和截留分離,穫得純化的融閤蛋白cpcB-CT.Western blotting分析錶明,產物具有與閤成人降鈣素相似的抗原決定簇部分;ELISA-受體法和大鼠降血鈣試驗錶明,其具有降血鈣作用.提示該融閤蛋白可能具有良好的應用前景.
장인화해어감합형강개소기인여조람단백적β아기기인상련,삽입융합표체재체pGEX-4T-3중,전화대장간균BL21.융합단백cpcB-CT기인재IPTG유도하획득고효표체.초성파쇄후,경SDS-PAGE분석,재48kD처유신증조,회도소묘측정,과표체단백량점50%～60%,85%위포함체.포함체경변성、복성,과Glutathion-Sepharose-4B친화흡부주,획함유GST적융합단백,해단백경응혈매소화화절류분리,획득순화적융합단백cpcB-CT.Western blotting분석표명,산물구유여합성인강개소상사적항원결정족부분;ELISA-수체법화대서강혈개시험표명,기구유강혈개작용.제시해융합단백가능구유량호적응용전경.
