生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
3期
405-408
,共4页
曾令江%陈敏%潘夕春%张启堂%廖志华
曾令江%陳敏%潘夕春%張啟堂%廖誌華
증령강%진민%반석춘%장계당%료지화
马铃薯%腺苷酸激酶%淀粉代谢工程%生物信息学%载体构建
馬鈴藷%腺苷痠激酶%澱粉代謝工程%生物信息學%載體構建
마령서%선감산격매%정분대사공정%생물신식학%재체구건
目的:克隆马铃薯腺苷酸激酶基因(adk)并进行生物信息学分析,构建反义表达载体.方法:用RT-PCR方法从西南地区马铃薯主推品种"米拉"中克隆adk编码序列,进行生物信息学分析后,反向插入植物高效表达载体pCAMBIA1304+,构建其反义植物表达载体.结果:克隆到的adk编码序列(stadk)为867 bp,编码由288个氨基酸残基构成的多肽.生物信息学分析表明,其亚细胞结构定位于质体,具有典型的腺苷酸激酶蛋白功能域ATP-AMP(Ap5A)结合位点和AMP结合位点,蛋白质三维模型具有典型的ADK蛋白立体结构.该蛋白与另一条来源于马铃薯的ADK2序列的遗传相似性最高,在进化树上与杏、苜蓿、水稻的距离最近,与拟南芥的距离最远.将构建好的反义表达载体pCAMBIA1304+-Astadk导入根癌农杆菌菌株LBA4404,获得了工程菌菌株.结论:克隆到stadk基因.生物信息学分析表明,在淀粉合成水平最高的植物中,腺苷酸激酶的分子进化水平和遗传相似性也最高.获得的工程菌菌株可用于遗传转化马铃薯、甘薯和木薯等重要的淀粉作物,为实现淀粉代谢工程奠定了基础.
目的:剋隆馬鈴藷腺苷痠激酶基因(adk)併進行生物信息學分析,構建反義錶達載體.方法:用RT-PCR方法從西南地區馬鈴藷主推品種"米拉"中剋隆adk編碼序列,進行生物信息學分析後,反嚮插入植物高效錶達載體pCAMBIA1304+,構建其反義植物錶達載體.結果:剋隆到的adk編碼序列(stadk)為867 bp,編碼由288箇氨基痠殘基構成的多肽.生物信息學分析錶明,其亞細胞結構定位于質體,具有典型的腺苷痠激酶蛋白功能域ATP-AMP(Ap5A)結閤位點和AMP結閤位點,蛋白質三維模型具有典型的ADK蛋白立體結構.該蛋白與另一條來源于馬鈴藷的ADK2序列的遺傳相似性最高,在進化樹上與杏、苜蓿、水稻的距離最近,與擬南芥的距離最遠.將構建好的反義錶達載體pCAMBIA1304+-Astadk導入根癌農桿菌菌株LBA4404,穫得瞭工程菌菌株.結論:剋隆到stadk基因.生物信息學分析錶明,在澱粉閤成水平最高的植物中,腺苷痠激酶的分子進化水平和遺傳相似性也最高.穫得的工程菌菌株可用于遺傳轉化馬鈴藷、甘藷和木藷等重要的澱粉作物,為實現澱粉代謝工程奠定瞭基礎.
목적:극륭마령서선감산격매기인(adk)병진행생물신식학분석,구건반의표체재체.방법:용RT-PCR방법종서남지구마령서주추품충"미랍"중극륭adk편마서렬,진행생물신식학분석후,반향삽입식물고효표체재체pCAMBIA1304+,구건기반의식물표체재체.결과:극륭도적adk편마서렬(stadk)위867 bp,편마유288개안기산잔기구성적다태.생물신식학분석표명,기아세포결구정위우질체,구유전형적선감산격매단백공능역ATP-AMP(Ap5A)결합위점화AMP결합위점,단백질삼유모형구유전형적ADK단백입체결구.해단백여령일조래원우마령서적ADK2서렬적유전상사성최고,재진화수상여행、목숙、수도적거리최근,여의남개적거리최원.장구건호적반의표체재체pCAMBIA1304+-Astadk도입근암농간균균주LBA4404,획득료공정균균주.결론:극륭도stadk기인.생물신식학분석표명,재정분합성수평최고적식물중,선감산격매적분자진화수평화유전상사성야최고.획득적공정균균주가용우유전전화마령서、감서화목서등중요적정분작물,위실현정분대사공정전정료기출.
