细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
5期
453-456
,共4页
王广兰%宫璀璀%王文丽%张长远%刘亚利%何培霞%郑淑娜%陈湘林
王廣蘭%宮璀璀%王文麗%張長遠%劉亞利%何培霞%鄭淑娜%陳湘林
왕엄란%궁최최%왕문려%장장원%류아리%하배하%정숙나%진상림
可溶性补体受体1%毕赤酵母细胞%生物学活性%真核表达载体
可溶性補體受體1%畢赤酵母細胞%生物學活性%真覈錶達載體
가용성보체수체1%필적효모세포%생물학활성%진핵표체재체
目的:采用酵母细胞分泌型载体pPIC9k表达人可溶性补体受体(sCR1),研究重组人sCR1融合蛋白的体外生物学活性.方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,然后将其克隆入毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPICgk中,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9ksCR1),经测序鉴定正确,电转化入毕赤酵母细胞SMD1168中,将经G418抗性筛选出的重组sCR1酵母细胞株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Westernblot鉴定,通过Ni2+ -NTA agarose亲和层析纯化后进行生物学活性鉴定.结果:获得毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k-sCRI,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母细胞株,经甲醇诱导含pPIC9k-sCR1的酵母SMD1168细胞表达出重组sCR1融合蛋白.此蛋白在SDS-PAGE上表现为Mr,约31 1300的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白及较高的生物学活性.结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原性及其生物学活性.
目的:採用酵母細胞分泌型載體pPIC9k錶達人可溶性補體受體(sCR1),研究重組人sCR1融閤蛋白的體外生物學活性.方法:從人外週血中提取總RNA,應用RT-PCR穫得人sCR1全長cDNA,然後將其剋隆入畢赤酵母細胞分泌型錶達載體pPICgk中,構建含人sCR1的重組質粒(pPIC9ksCR1),經測序鑒定正確,電轉化入畢赤酵母細胞SMD1168中,將經G418抗性篩選齣的重組sCR1酵母細胞株進行PCR鑒定,經甲醇誘導,錶達產物經SDS-PAGE分析和Westernblot鑒定,通過Ni2+ -NTA agarose親和層析純化後進行生物學活性鑒定.結果:穫得畢赤酵母細胞分泌型錶達載體pPIC9k-sCRI,經G418篩選及PCR鑒定得到高拷貝整閤的重組酵母細胞株,經甲醇誘導含pPIC9k-sCR1的酵母SMD1168細胞錶達齣重組sCR1融閤蛋白.此蛋白在SDS-PAGE上錶現為Mr,約31 1300的蛋白區帶,在Western blot分析中可被sCR1的CD35單剋隆抗體(mAb)識彆.經Ni2+-NTA agarose親和層析純化後得到較純的sCR1融閤蛋白及較高的生物學活性.結論:人sCR1融閤蛋白在酵母細胞錶達繫統中的高水平錶達,併且有與人體天然蛋白相同的抗原性及其生物學活性.
목적:채용효모세포분비형재체pPIC9k표체인가용성보체수체(sCR1),연구중조인sCR1융합단백적체외생물학활성.방법:종인외주혈중제취총RNA,응용RT-PCR획득인sCR1전장cDNA,연후장기극륭입필적효모세포분비형표체재체pPICgk중,구건함인sCR1적중조질립(pPIC9ksCR1),경측서감정정학,전전화입필적효모세포SMD1168중,장경G418항성사선출적중조sCR1효모세포주진행PCR감정,경갑순유도,표체산물경SDS-PAGE분석화Westernblot감정,통과Ni2+ -NTA agarose친화층석순화후진행생물학활성감정.결과:획득필적효모세포분비형표체재체pPIC9k-sCRI,경G418사선급PCR감정득도고고패정합적중조효모세포주,경갑순유도함pPIC9k-sCR1적효모SMD1168세포표체출중조sCR1융합단백.차단백재SDS-PAGE상표현위Mr,약31 1300적단백구대,재Western blot분석중가피sCR1적CD35단극륭항체(mAb)식별.경Ni2+-NTA agarose친화층석순화후득도교순적sCR1융합단백급교고적생물학활성.결론:인sCR1융합단백재효모세포표체계통중적고수평표체,병차유여인체천연단백상동적항원성급기생물학활성.
