宁夏医学杂志
寧夏醫學雜誌
저하의학잡지
NINGXIA MEDICAL JOURNAL
2010年
3期
200-202,前插1
,共4页
马学平%李丽%秦迎旭%高建炜%田涛
馬學平%李麗%秦迎旭%高建煒%田濤
마학평%리려%진영욱%고건위%전도
人体寄生细粒棘球蚴%基因组DNA提取%PCR-RAPD体系
人體寄生細粒棘毬蚴%基因組DNA提取%PCR-RAPD體繫
인체기생세립극구유%기인조DNA제취%PCR-RAPD체계
目的 建立PCR-RAPD反应体系,提升细粒棘球蚴随机扩增多态性DNA (RAPD)遗传多态性研究的稳定性,为研究细粒棘球蚴的分类学以及包虫病的分子流行病学奠定基础. 方法采用改进的酚-氯仿抽提法提取细粒棘球蚴基因组DNA,用单因素筛选方法建立PCR-RAPD分析体系.结果 采用改进的酚/氯仿抽提方法提取细粒棘球蚴基因组DNA质量高,适用于PCR-RAPD扩增分析;在25μL体系中,RAPD-PCR扩增反应各成分的最佳浓度为:dNTP 0.2-0.3 mmol/L、Taq酶 2.5U、随机引物 0.8-1.4μmol/L,模板为60ng.PCR扩增最佳条件为:95℃预变性5min;94℃变性30s、32℃退火45s、72℃延伸1min、共35个循环;最后72℃延伸10min;初步从20条引物中筛选出11条带型丰富的随机引物.结论 酚-氯仿适用于提取细粒棘球蚴基因组DNA,优化的RAPD反应体系和筛选出的随机引物适合进行细粒棘球蚴RAPD遗传多态性分析.
目的 建立PCR-RAPD反應體繫,提升細粒棘毬蚴隨機擴增多態性DNA (RAPD)遺傳多態性研究的穩定性,為研究細粒棘毬蚴的分類學以及包蟲病的分子流行病學奠定基礎. 方法採用改進的酚-氯倣抽提法提取細粒棘毬蚴基因組DNA,用單因素篩選方法建立PCR-RAPD分析體繫.結果 採用改進的酚/氯倣抽提方法提取細粒棘毬蚴基因組DNA質量高,適用于PCR-RAPD擴增分析;在25μL體繫中,RAPD-PCR擴增反應各成分的最佳濃度為:dNTP 0.2-0.3 mmol/L、Taq酶 2.5U、隨機引物 0.8-1.4μmol/L,模闆為60ng.PCR擴增最佳條件為:95℃預變性5min;94℃變性30s、32℃退火45s、72℃延伸1min、共35箇循環;最後72℃延伸10min;初步從20條引物中篩選齣11條帶型豐富的隨機引物.結論 酚-氯倣適用于提取細粒棘毬蚴基因組DNA,優化的RAPD反應體繫和篩選齣的隨機引物適閤進行細粒棘毬蚴RAPD遺傳多態性分析.
목적 건립PCR-RAPD반응체계,제승세립극구유수궤확증다태성DNA (RAPD)유전다태성연구적은정성,위연구세립극구유적분류학이급포충병적분자류행병학전정기출. 방법채용개진적분-록방추제법제취세립극구유기인조DNA,용단인소사선방법건립PCR-RAPD분석체계.결과 채용개진적분/록방추제방법제취세립극구유기인조DNA질량고,괄용우PCR-RAPD확증분석;재25μL체계중,RAPD-PCR확증반응각성분적최가농도위:dNTP 0.2-0.3 mmol/L、Taq매 2.5U、수궤인물 0.8-1.4μmol/L,모판위60ng.PCR확증최가조건위:95℃예변성5min;94℃변성30s、32℃퇴화45s、72℃연신1min、공35개순배;최후72℃연신10min;초보종20조인물중사선출11조대형봉부적수궤인물.결론 분-록방괄용우제취세립극구유기인조DNA,우화적RAPD반응체계화사선출적수궤인물괄합진행세립극구유RAPD유전다태성분석.
