实时定量逆转录PCR检测慢性淋巴细胞白血病puma基因mRNA的表达及其临床意义
실시정량역전록PCR검측만성림파세포백혈병puma기인mRNA적표체급기림상의의
Detection of Puma mRNA Levels by Real-time Quantitative RT-PCR in Chronic Lymphocytic Leukemia and Its Clinical Significance
  • 万方数据
    中国实验血液学杂志 중국실험혈액학잡지
    JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
    2010年 4期 843-848 ,共6页

    朱海嘉%徐卫%曹鑫%方成%朱丹霞%董华洁%王冬梅%乔纯%缪扣荣%刘澎%李建勇

    주해가%서위%조흠%방성%주단하%동화길%왕동매%교순%무구영%류팽%리건용

    慢性淋巴细胞白血病%puma基因%实时定量RT-PCR 慢性淋巴細胞白血病%puma基因%實時定量RT-PCR
    만성림파세포백혈병%puma기인%실시정량RT-PCR
    Puma为一种凋亡调控因子.本研究探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者p53上调puma mRNA的表达情况,并探索其在评估CLL预后中的意义.采用基于SYBR Green Ⅰ荧光染料法的实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)方法检测100例CLL患者及11名健康对照者外周血标本中puma基因的表达,以β-actin为内参照,用2(-△Ct)方法计算puma的相对定量值,组间分析采用秩和检验.结果显示,qRT-PCR标准曲线的R2均≥0.990,批内差及批间差变异系数(CV)均小于5%,灵敏度可达102copies/μg RNA.100例CLL患者puma基因表达水平中位数为1.038×10-3(4.106×10-4-2.806×10-3);11名健康对照者puma表达水平中位数为1.220×10-3(7.233×10-4-1.405×10-3),二者无显著性差异(U=544.5,p=0.957).临床分期较早(Binet分期A期)的患者puma表达水平明显高于临床分期较晚(Binet分期B期、C期)的患者(p<0.001);具有CD38表达阳性、ZAP-70蛋白表达阳性、血清乳酸脱氢酶水平增高、血清β2-微球蛋白水平增高的患者,其puma基因表达水平均明显低于无以上不良预后因素的患者,差异显著(p值分别为0.002,0.012,0.009和0.046);FISH检测显示存在12号染色体三体和14q32易位的患者puma表达水平明显低于无以上分子遗传学异常者,其差异显著(p值分别为0.003和0.045).结论:qRT-PCR方法检测puma表达灵敏可靠,puma表达水平与CLL多种预后因素存在相关性,在评估CLL预后中具有重要价值.
    Puma위일충조망조공인자.본연구탐토만성림파세포백혈병(CLL)환자p53상조puma mRNA적표체정황,병탐색기재평고CLL예후중적의의.채용기우SYBR Green Ⅰ형광염료법적실시정량역전록PCR(qRT-PCR)방법검측100례CLL환자급11명건강대조자외주혈표본중puma기인적표체,이β-actin위내삼조,용2(-△Ct)방법계산puma적상대정량치,조간분석채용질화검험.결과현시,qRT-PCR표준곡선적R2균≥0.990,비내차급비간차변이계수(CV)균소우5%,령민도가체102copies/μg RNA.100례CLL환자puma기인표체수평중위수위1.038×10-3(4.106×10-4-2.806×10-3);11명건강대조자puma표체수평중위수위1.220×10-3(7.233×10-4-1.405×10-3),이자무현저성차이(U=544.5,p=0.957).림상분기교조(Binet분기A기)적환자puma표체수평명현고우림상분기교만(Binet분기B기、C기)적환자(p<0.001);구유CD38표체양성、ZAP-70단백표체양성、혈청유산탈경매수평증고、혈청β2-미구단백수평증고적환자,기puma기인표체수평균명현저우무이상불량예후인소적환자,차이현저(p치분별위0.002,0.012,0.009화0.046);FISH검측현시존재12호염색체삼체화14q32역위적환자puma표체수평명현저우무이상분자유전학이상자,기차이현저(p치분별위0.003화0.045).결론:qRT-PCR방법검측puma표체령민가고,puma표체수평여CLL다충예후인소존재상관성,재평고CLL예후중구유중요개치.
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