中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2011年
5期
479-482
,共4页
武军华%魏文清%贾培嫒%赵宇%王晨宇%刘晶%王玉霞
武軍華%魏文清%賈培嬡%趙宇%王晨宇%劉晶%王玉霞
무군화%위문청%가배애%조우%왕신우%류정%왕옥하
肿瘤抑制蛋白质P53%单克隆抗体%酶联免疫吸附分析
腫瘤抑製蛋白質P53%單剋隆抗體%酶聯免疫吸附分析
종류억제단백질P53%단극륭항체%매련면역흡부분석
目的 制备可特异性地识别肿瘤抑制蛋白质P53的单克隆抗体.方法 应用重组人野生型P53蛋白为免疫抗原,采用经典的细胞融合技术制备单克隆抗体.亲和层析纯化抗体蛋白；ELISA测定抗体滴度.纯化的抗体作用于含有不同p53基因型的MDA-MB-231[p53(mutant)]和[H1299,p53(null)]肿瘤细胞系,Western印迹、免疫组化和免疫荧光染色法检测抗体与内源性P53蛋白的结合特异性.结果 对筛选到的3株单克隆抗体1P15,2P37和3P40,进行了亲和层析技术纯化.SDS-PAGE结果显示,纯化后的3株抗体纯度均在90%以上；ELISA滴度测定结果显示,3株单抗的滴度均在1∶6000以上.免疫印迹结果表明,3株抗体在p53检测中具有较高的灵敏度,其中3P40的灵敏度最高,可以达到5 ng.Western印迹、免疫组化以及免疫荧光染色结果显示,抗体与细胞内源性P53蛋白的结合特异性,说明3P40可以特异性地结合细胞总蛋白提取物以及细胞中内源性P53蛋白,而在检测不表达P53蛋白的细胞系样品时,没有非特异性结合.结论 成功制备3株对P53具有高亲和力的单克隆抗体,其中3P40的抗体滴度和灵敏度最佳.
目的 製備可特異性地識彆腫瘤抑製蛋白質P53的單剋隆抗體.方法 應用重組人野生型P53蛋白為免疫抗原,採用經典的細胞融閤技術製備單剋隆抗體.親和層析純化抗體蛋白；ELISA測定抗體滴度.純化的抗體作用于含有不同p53基因型的MDA-MB-231[p53(mutant)]和[H1299,p53(null)]腫瘤細胞繫,Western印跡、免疫組化和免疫熒光染色法檢測抗體與內源性P53蛋白的結閤特異性.結果 對篩選到的3株單剋隆抗體1P15,2P37和3P40,進行瞭親和層析技術純化.SDS-PAGE結果顯示,純化後的3株抗體純度均在90%以上；ELISA滴度測定結果顯示,3株單抗的滴度均在1∶6000以上.免疫印跡結果錶明,3株抗體在p53檢測中具有較高的靈敏度,其中3P40的靈敏度最高,可以達到5 ng.Western印跡、免疫組化以及免疫熒光染色結果顯示,抗體與細胞內源性P53蛋白的結閤特異性,說明3P40可以特異性地結閤細胞總蛋白提取物以及細胞中內源性P53蛋白,而在檢測不錶達P53蛋白的細胞繫樣品時,沒有非特異性結閤.結論 成功製備3株對P53具有高親和力的單剋隆抗體,其中3P40的抗體滴度和靈敏度最佳.
목적 제비가특이성지식별종류억제단백질P53적단극륭항체.방법 응용중조인야생형P53단백위면역항원,채용경전적세포융합기술제비단극륭항체.친화층석순화항체단백；ELISA측정항체적도.순화적항체작용우함유불동p53기인형적MDA-MB-231[p53(mutant)]화[H1299,p53(null)]종류세포계,Western인적、면역조화화면역형광염색법검측항체여내원성P53단백적결합특이성.결과 대사선도적3주단극륭항체1P15,2P37화3P40,진행료친화층석기술순화.SDS-PAGE결과현시,순화후적3주항체순도균재90%이상；ELISA적도측정결과현시,3주단항적적도균재1∶6000이상.면역인적결과표명,3주항체재p53검측중구유교고적령민도,기중3P40적령민도최고,가이체도5 ng.Western인적、면역조화이급면역형광염색결과현시,항체여세포내원성P53단백적결합특이성,설명3P40가이특이성지결합세포총단백제취물이급세포중내원성P53단백,이재검측불표체P53단백적세포계양품시,몰유비특이성결합.결론 성공제비3주대P53구유고친화력적단극륭항체,기중3P40적항체적도화령민도최가.
