复旦学报(自然科学版)
複旦學報(自然科學版)
복단학보(자연과학판)
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2004年
2期
195-199,205
,共6页
于海东%张雪莲%王宝林%雷建强%曹健%淳于利娟%许云敏%王洪海
于海東%張雪蓮%王寶林%雷建彊%曹健%淳于利娟%許雲敏%王洪海
우해동%장설련%왕보림%뢰건강%조건%순우리연%허운민%왕홍해
结核分支杆菌H37Rv%莽草酸途径%莽草酸脱氢酶SD
結覈分支桿菌H37Rv%莽草痠途徑%莽草痠脫氫酶SD
결핵분지간균H37Rv%망초산도경%망초산탈경매SD
以结核分支杆菌H37Rv基因组为模板,扩增了该菌株的莽草酸脱氢酶基因aroE,通过在大肠杆菌BL21(DE3)pLYS中表达,纯化出可溶性的重组结核分支杆菌莽草酸脱氢酶(SD). 对其酶学性质测定分析表明:在辅酶NADPH作用下该酶可催化还原3-脱氢莽草酸生成莽草酸,最适pH值为11,最适温度为63 ℃,比活性8.26×104 U/mg. Mg2+,Ni2+,Zn2+等金属离子及NP40、TritonX-100等变性剂对其酶活有一定的促进作用,而SDS则强烈抑制该酶活性. 应用圆二色仪初步测定了重组蛋白的二级结构,重组SD的二级结构中大约有29.2%的α螺旋,9.3%β折叠,32.7%β转角,28.8%无规卷曲. 结核分支杆菌H37Rv莽草酸脱氢酶基因的克隆,为该酶的晶体结构分析、免疫学研究及抗结核药物靶点的筛选奠定基础.
以結覈分支桿菌H37Rv基因組為模闆,擴增瞭該菌株的莽草痠脫氫酶基因aroE,通過在大腸桿菌BL21(DE3)pLYS中錶達,純化齣可溶性的重組結覈分支桿菌莽草痠脫氫酶(SD). 對其酶學性質測定分析錶明:在輔酶NADPH作用下該酶可催化還原3-脫氫莽草痠生成莽草痠,最適pH值為11,最適溫度為63 ℃,比活性8.26×104 U/mg. Mg2+,Ni2+,Zn2+等金屬離子及NP40、TritonX-100等變性劑對其酶活有一定的促進作用,而SDS則彊烈抑製該酶活性. 應用圓二色儀初步測定瞭重組蛋白的二級結構,重組SD的二級結構中大約有29.2%的α螺鏇,9.3%β摺疊,32.7%β轉角,28.8%無規捲麯. 結覈分支桿菌H37Rv莽草痠脫氫酶基因的剋隆,為該酶的晶體結構分析、免疫學研究及抗結覈藥物靶點的篩選奠定基礎.
이결핵분지간균H37Rv기인조위모판,확증료해균주적망초산탈경매기인aroE,통과재대장간균BL21(DE3)pLYS중표체,순화출가용성적중조결핵분지간균망초산탈경매(SD). 대기매학성질측정분석표명:재보매NADPH작용하해매가최화환원3-탈경망초산생성망초산,최괄pH치위11,최괄온도위63 ℃,비활성8.26×104 U/mg. Mg2+,Ni2+,Zn2+등금속리자급NP40、TritonX-100등변성제대기매활유일정적촉진작용,이SDS칙강렬억제해매활성. 응용원이색의초보측정료중조단백적이급결구,중조SD적이급결구중대약유29.2%적α라선,9.3%β절첩,32.7%β전각,28.8%무규권곡. 결핵분지간균H37Rv망초산탈경매기인적극륭,위해매적정체결구분석、면역학연구급항결핵약물파점적사선전정기출.
