CAJ | 학술논문

目的:以无糖培养12 h后再以完全培养基继续培养的方法模拟细胞缺血后再灌注的损伤情况,观察葡萄糖调节蛋白75在缺糖及缺糖再灌注条件下对细胞的保护作用. 方法:实验于2002-09/2004-02在复旦大学医学院医学与细胞遗传系实验室完成.以中国仓鼠肺细胞株为材料,置于无糖条件下培养12 h后,重换含糖培养基继续培养以建立缺血再灌注体外培养模型,并采用脂质体介导的方法,以葡萄糖调节蛋白75表达载体(pcDNA3/葡萄糖调节蛋白75)转染中国仓鼠肺细胞细胞,获得过表达葡萄糖凋节蛋白75的细胞克隆,运用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法,乳酸脱氢酶释放率测定等方法评估细胞损伤程度.结果:①克隆细胞用葡萄糖调节蛋白75抗体对其蛋白质产物进行印迹分析,克隆细胞葡萄糖调节蛋白75蛋白表达量明显高于对照组.②四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法显示,未转染细胞缺糖再灌注的增殖能力比完全培养20 h增殖能力明显降低(P＜0.05),且低于无糖培养20 h(P＜0.05);重新灌注后,葡萄糖调节蛋白75过表达的细胞的增殖能力明显高于对照组(P＜0.01).③乳酸脱氢酶释放测定结果显示,转染细胞缺糖再灌注乳酸脱氢酶释放百分比显著高于完全培养20 h(P＜0.01),与无糖培养20 h无明显差别(P＞0.05),葡萄糖调节蛋白75过表达的细胞乳酸脱氢酶释放百分比显著低于对照组(P＜0.01). 结论:通过建立过表达葡萄糖调节蛋白75的细胞克隆以无糖培养模拟能量代谢应激,观察葡萄糖调节蛋白75对处于能量代谢性应激中细胞的保护作用,以及应激后细胞的恢复情况.发现表达葡萄糖调节蛋白75的细胞较未转染的细胞具有更高的存活率,细胞膜损伤和DNA损伤较轻,说明葡萄糖调节蛋白75在细胞缺糖后再灌注损伤中具有一定的保护作用.
목적:이무당배양12 h후재이완전배양기계속배양적방법모의세포결혈후재관주적손상정황,관찰포도당조절단백75재결당급결당재관주조건하대세포적보호작용. 방법:실험우2002-09/2004-02재복단대학의학원의학여세포유전계실험실완성.이중국창서폐세포주위재료,치우무당조건하배양12 h후,중환함당배양기계속배양이건립결혈재관주체외배양모형,병채용지질체개도적방법,이포도당조절단백75표체재체(pcDNA3/포도당조절단백75)전염중국창서폐세포세포,획득과표체포도당조절단백75적세포극륭,운용사갑기우담서염미량매반응비색법,유산탈경매석방솔측정등방법평고세포손상정도.결과:①극륭세포용포도당조절단백75항체대기단백질산물진행인적분석,극륭세포포도당조절단백75단백표체량명현고우대조조.②사갑기우담서염미량매반응비색법현시,미전염세포결당재관주적증식능력비완전배양20 h증식능력명현강저(P＜0.05),차저우무당배양20 h(P＜0.05);중신관주후,포도당조절단백75과표체적세포적증식능력명현고우대조조(P＜0.01).③유산탈경매석방측정결과현시,전염세포결당재관주유산탈경매석방백분비현저고우완전배양20 h(P＜0.01),여무당배양20 h무명현차별(P＞0.05),포도당조절단백75과표체적세포유산탈경매석방백분비현저저우대조조(P＜0.01). 결론:통과건립과표체포도당조절단백75적세포극륭이무당배양모의능량대사응격,관찰포도당조절단백75대처우능량대사성응격중세포적보호작용,이급응격후세포적회복정황.발현표체포도당조절단백75적세포교미전염적세포구유경고적존활솔,세포막손상화DNA손상교경,설명포도당조절단백75재세포결당후재관주손상중구유일정적보호작용.