农业科学与技术（英文版）
農業科學與技術（英文版）
농업과학여기술（영문판）
AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY
2010年
1期
31-32,106
,共3页
刘清岱%王金菊%李红涛%赵昱%张治州
劉清岱%王金菊%李紅濤%趙昱%張治州
류청대%왕금국%리홍도%조욱%장치주
紫萍%半叶状体%衰老%内肽酶
紫萍%半葉狀體%衰老%內肽酶
자평%반협상체%쇠로%내태매
Spirodela polyrrhiza%Half-fronds%Senescence%Endopeptidase
[目的]研究与紫萍半叶状体衰老相关的内肽酶及其性质.[方法]采用明胶-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析与衰老相关的内肽酶同工酶.通过改变电泳分离胶中底物蛋白浓度,可以使正染的蛋白质标准条带和负染的内肽酶条带同时显现出来,从而了解内肽酶的表征分子量.将进行电泳、复性后的聚丙烯酰胺凝胶切成相同大小的条带,分别置于含有同等浓度蛋白酶抑制剂[2 mmol/L丝氨酸型内肽酶抑制剂(PMSF)、2 mmol/L金属型内肽酶抑制剂(EDTA)、25 μmol/L半胱氨酸型内肽酶抑制剂(E-64)]的酶反应缓冲液中进行反应,同时以不加抑制剂的胶条处理5 d的样品作为对照,以分析内肽酶类型.[结果]衰老紫萍半叶状体的内肽酶同工酶谱上共出现6种内肽酶.其中,内肽酶HEP1、HEP2、HEP4和HEP6在衰老过程中出现,且活性受细胞分裂素的调控,可能是衰老相关的内肽酶.经过蛋白酶抑制剂的分析结果表明,与对照相比,E-64未能对内肽酶条带HEP1产生抑制作用,而EDTA和PMSF都能抑制内肽酶活性,且EDTA作用较明显,因此,初步鉴定分子量为120 kD的HEP1为金属型内肽酶,其他3种内肽酶均为半胱氨酸型内肽酶.[结论]在紫萍半叶状体衰老早期金属型内肽酶活性较强,而在衰老后期半胱氨酸型内肽酶大量出现并具有较高的活性.
[目的]研究與紫萍半葉狀體衰老相關的內肽酶及其性質.[方法]採用明膠-SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術分析與衰老相關的內肽酶同工酶.通過改變電泳分離膠中底物蛋白濃度,可以使正染的蛋白質標準條帶和負染的內肽酶條帶同時顯現齣來,從而瞭解內肽酶的錶徵分子量.將進行電泳、複性後的聚丙烯酰胺凝膠切成相同大小的條帶,分彆置于含有同等濃度蛋白酶抑製劑[2 mmol/L絲氨痠型內肽酶抑製劑(PMSF)、2 mmol/L金屬型內肽酶抑製劑(EDTA)、25 μmol/L半胱氨痠型內肽酶抑製劑(E-64)]的酶反應緩遲液中進行反應,同時以不加抑製劑的膠條處理5 d的樣品作為對照,以分析內肽酶類型.[結果]衰老紫萍半葉狀體的內肽酶同工酶譜上共齣現6種內肽酶.其中,內肽酶HEP1、HEP2、HEP4和HEP6在衰老過程中齣現,且活性受細胞分裂素的調控,可能是衰老相關的內肽酶.經過蛋白酶抑製劑的分析結果錶明,與對照相比,E-64未能對內肽酶條帶HEP1產生抑製作用,而EDTA和PMSF都能抑製內肽酶活性,且EDTA作用較明顯,因此,初步鑒定分子量為120 kD的HEP1為金屬型內肽酶,其他3種內肽酶均為半胱氨痠型內肽酶.[結論]在紫萍半葉狀體衰老早期金屬型內肽酶活性較彊,而在衰老後期半胱氨痠型內肽酶大量齣現併具有較高的活性.
[목적]연구여자평반협상체쇠로상관적내태매급기성질.[방법]채용명효-SDS-취병희선알응효전영기술분석여쇠로상관적내태매동공매.통과개변전영분리효중저물단백농도,가이사정염적단백질표준조대화부염적내태매조대동시현현출래,종이료해내태매적표정분자량.장진행전영、복성후적취병희선알응효절성상동대소적조대,분별치우함유동등농도단백매억제제[2 mmol/L사안산형내태매억제제(PMSF)、2 mmol/L금속형내태매억제제(EDTA)、25 μmol/L반광안산형내태매억제제(E-64)]적매반응완충액중진행반응,동시이불가억제제적효조처리5 d적양품작위대조,이분석내태매류형.[결과]쇠로자평반협상체적내태매동공매보상공출현6충내태매.기중,내태매HEP1、HEP2、HEP4화HEP6재쇠로과정중출현,차활성수세포분렬소적조공,가능시쇠로상관적내태매.경과단백매억제제적분석결과표명,여대조상비,E-64미능대내태매조대HEP1산생억제작용,이EDTA화PMSF도능억제내태매활성,차EDTA작용교명현,인차,초보감정분자량위120 kD적HEP1위금속형내태매,기타3충내태매균위반광안산형내태매.[결론]재자평반협상체쇠로조기금속형내태매활성교강,이재쇠로후기반광안산형내태매대량출현병구유교고적활성.
[Objective]To study endopeptidases in Spirodela polyrrhiza half-fronds during senescence and their characters.[Method]Changes in endopeptidase iscenzymes of the Spirodela polyrrhiza half-fronds during senescence were detected by gelatin-SDS-PAGE electrophoresis,and their types were analyzed with protease inhibitors.[Result]Six endopeptidases were detected in the Spirodela polyrrhiza haft-fronds during senescence.Among them, HEP1、 HEP2、 HEP4 and HEP6(high molecular-weight endopretease)were senescence-related endopeptidases.[Condusion]The metailoendopeptidase plays significant roles at the early stage of senescence, and the cysteine endopeptidase are the most abundant at the late stage of senescence.
