中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2010年
10期
795-799
,共5页
李洪涛%张新涛%刘明%刘春国%杜金玲%石薇琳%孙恩成
李洪濤%張新濤%劉明%劉春國%杜金玲%石薇琳%孫恩成
리홍도%장신도%류명%류춘국%두금령%석미림%손은성
A型禽流感病毒%M2e基因%原核表达%多克隆抗体%免疫保护力
A型禽流感病毒%M2e基因%原覈錶達%多剋隆抗體%免疫保護力
A형금류감병독%M2e기인%원핵표체%다극륭항체%면역보호력
为研究含禽流感病毒(AIV)不同拷贝数基质蛋白胞外功能区(M2e)亚单位疫苗在SPF鸡体中的免疫保护效力差异,根据已发表的高致病性AIV M2基因序列设计合成两对引物,利用PCR技术扩增单个M2e基因片段,以此为基础顺次串联得到不同拷贝数的M2e基因片段,并将其克隆到pMAL-C2x载体中,构建不同拷贝数的A型AIV M2e基因的重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定.表达产物经纯化后免疫家兔、SPF鸡,制备抗M2e融合蛋白的多克隆抗体.Western blot和间接免疫荧光试验检测纯化的融合蛋白免疫原性,间接ELISA测定鸡血清抗体水平,表明MBP-3M2e融合蛋白的抗体水平较高,且MBP-3M2e亚单位疫苗产生最好的免疫保护力.
為研究含禽流感病毒(AIV)不同拷貝數基質蛋白胞外功能區(M2e)亞單位疫苗在SPF鷄體中的免疫保護效力差異,根據已髮錶的高緻病性AIV M2基因序列設計閤成兩對引物,利用PCR技術擴增單箇M2e基因片段,以此為基礎順次串聯得到不同拷貝數的M2e基因片段,併將其剋隆到pMAL-C2x載體中,構建不同拷貝數的A型AIV M2e基因的重組錶達質粒,轉化大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞,經IPTG誘導錶達,SDS-PAGE鑒定.錶達產物經純化後免疫傢兔、SPF鷄,製備抗M2e融閤蛋白的多剋隆抗體.Western blot和間接免疫熒光試驗檢測純化的融閤蛋白免疫原性,間接ELISA測定鷄血清抗體水平,錶明MBP-3M2e融閤蛋白的抗體水平較高,且MBP-3M2e亞單位疫苗產生最好的免疫保護力.
위연구함금류감병독(AIV)불동고패수기질단백포외공능구(M2e)아단위역묘재SPF계체중적면역보호효력차이,근거이발표적고치병성AIV M2기인서렬설계합성량대인물,이용PCR기술확증단개M2e기인편단,이차위기출순차천련득도불동고패수적M2e기인편단,병장기극륭도pMAL-C2x재체중,구건불동고패수적A형AIV M2e기인적중조표체질립,전화대장간균BL21(DE3)감수태세포,경IPTG유도표체,SDS-PAGE감정.표체산물경순화후면역가토、SPF계,제비항M2e융합단백적다극륭항체.Western blot화간접면역형광시험검측순화적융합단백면역원성,간접ELISA측정계혈청항체수평,표명MBP-3M2e융합단백적항체수평교고,차MBP-3M2e아단위역묘산생최호적면역보호력.
