中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
31期
5839-5842
,共4页
邱明链%方航荣%陈丽红%刘景丰
邱明鏈%方航榮%陳麗紅%劉景豐
구명련%방항영%진려홍%류경봉
基因%FasL%增强型绿色荧光蛋白%载体%基因重组
基因%FasL%增彊型綠色熒光蛋白%載體%基因重組
기인%FasL%증강형록색형광단백%재체%기인중조
背景:FasL通过与靶细胞上Fas结合诱导程序性细胞死亡,可维持机体内稳态,诱导同种异基因移植免疫耐受,促进肿瘤细胞凋亡.目的:构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因hFasL的真核表达载体pIRES2-EGFP-hFasL.方法:通过实时聚合酶链反应RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞中扩增出hFasL基因,与真核空载体 plRES2-EGFP一起,经XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切,T4 DNA连接酶连接,从而构建pIRES2-EGFP-hFasL.用紫外分光光度计测定质粒浓度及纯度,经酶切、PCR技术、基因测序等方法进行鉴定.结果与结论:扩增出的hFasL条带大小约846 bp,构建的plRES2-EGFP-hFasL经酶切后在846 bp和2 000 bp处有特异性条带,DNA测序证实hFasL与Genebank上的序列完全一致.提示成功构建了含有hFasL及EGFP的真核表达载体plRES2-EGFP-hFasL.
揹景:FasL通過與靶細胞上Fas結閤誘導程序性細胞死亡,可維持機體內穩態,誘導同種異基因移植免疫耐受,促進腫瘤細胞凋亡.目的:構建帶有增彊型綠色熒光蛋白報告基因EGFP及目的基因hFasL的真覈錶達載體pIRES2-EGFP-hFasL.方法:通過實時聚閤酶鏈反應RT-PCR方法從人外週血淋巴細胞中擴增齣hFasL基因,與真覈空載體 plRES2-EGFP一起,經XhoⅠ和EcoRⅠ雙酶切,T4 DNA連接酶連接,從而構建pIRES2-EGFP-hFasL.用紫外分光光度計測定質粒濃度及純度,經酶切、PCR技術、基因測序等方法進行鑒定.結果與結論:擴增齣的hFasL條帶大小約846 bp,構建的plRES2-EGFP-hFasL經酶切後在846 bp和2 000 bp處有特異性條帶,DNA測序證實hFasL與Genebank上的序列完全一緻.提示成功構建瞭含有hFasL及EGFP的真覈錶達載體plRES2-EGFP-hFasL.
배경:FasL통과여파세포상Fas결합유도정서성세포사망,가유지궤체내은태,유도동충이기인이식면역내수,촉진종류세포조망.목적:구건대유증강형록색형광단백보고기인EGFP급목적기인hFasL적진핵표체재체pIRES2-EGFP-hFasL.방법:통과실시취합매련반응RT-PCR방법종인외주혈림파세포중확증출hFasL기인,여진핵공재체 plRES2-EGFP일기,경XhoⅠ화EcoRⅠ쌍매절,T4 DNA련접매련접,종이구건pIRES2-EGFP-hFasL.용자외분광광도계측정질립농도급순도,경매절、PCR기술、기인측서등방법진행감정.결과여결론:확증출적hFasL조대대소약846 bp,구건적plRES2-EGFP-hFasL경매절후재846 bp화2 000 bp처유특이성조대,DNA측서증실hFasL여Genebank상적서렬완전일치.제시성공구건료함유hFasL급EGFP적진핵표체재체plRES2-EGFP-hFasL.
