中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2011年
7期
526-530
,共5页
郭瑶%汪平%董沁芳%程菊会%徐辉%丁先锋%郭江峰%姜永厚
郭瑤%汪平%董沁芳%程菊會%徐輝%丁先鋒%郭江峰%薑永厚
곽요%왕평%동심방%정국회%서휘%정선봉%곽강봉%강영후
LDR-PCR%通用芯片%多重检测%猪病毒
LDR-PCR%通用芯片%多重檢測%豬病毒
LDR-PCR%통용심편%다중검측%저병독
为快速、灵敏、准确地同时检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)和伪狂犬病毒(PRV)的方法,本研究采用连接酶检测反应(LDR)-PCR和基因芯片技术建立一种新型检测方法.首先在3种病毒的保守区内分别设计一对LDR探针,两端各连接一段通用序列,依次进行LDR、通用引物荧光标记扩增和芯片杂交,同时比较引物标记和Cy5 -dCTP标记方法的灵敏度.结果表明该方法可以特异地检测PCV2、PPV和PRV3种病毒,而对牛病毒性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪圆环病毒1型检测结果均为阴性;对3种病毒的最低检测限少于10个拷贝;Cy5-dCTP标记检测的灵敏度显著高于引物标记.利用建立的方法对41例临床样品进行检测,与普通PCR检测结果符合率为97.6％～100％.该方法的建立为基础研究和临床应用提供了技术平台.
為快速、靈敏、準確地同時檢測和鑒彆豬圓環病毒2型(PCV2)、豬細小病毒(PPV)和偽狂犬病毒(PRV)的方法,本研究採用連接酶檢測反應(LDR)-PCR和基因芯片技術建立一種新型檢測方法.首先在3種病毒的保守區內分彆設計一對LDR探針,兩耑各連接一段通用序列,依次進行LDR、通用引物熒光標記擴增和芯片雜交,同時比較引物標記和Cy5 -dCTP標記方法的靈敏度.結果錶明該方法可以特異地檢測PCV2、PPV和PRV3種病毒,而對牛病毒性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬繁殖與呼吸障礙綜閤徵病毒、豬瘟病毒、乙型腦炎病毒、豬圓環病毒1型檢測結果均為陰性;對3種病毒的最低檢測限少于10箇拷貝;Cy5-dCTP標記檢測的靈敏度顯著高于引物標記.利用建立的方法對41例臨床樣品進行檢測,與普通PCR檢測結果符閤率為97.6％～100％.該方法的建立為基礎研究和臨床應用提供瞭技術平檯.
위쾌속、령민、준학지동시검측화감별저원배병독2형(PCV2)、저세소병독(PPV)화위광견병독(PRV)적방법,본연구채용련접매검측반응(LDR)-PCR화기인심편기술건립일충신형검측방법.수선재3충병독적보수구내분별설계일대LDR탐침,량단각련접일단통용서렬,의차진행LDR、통용인물형광표기확증화심편잡교,동시비교인물표기화Cy5 -dCTP표기방법적령민도.결과표명해방법가이특이지검측PCV2、PPV화PRV3충병독,이대우병독성복사병독、저전염성위장염병독、저류행성복사병독、저번식여호흡장애종합정병독、저온병독、을형뇌염병독、저원배병독1형검측결과균위음성;대3충병독적최저검측한소우10개고패;Cy5-dCTP표기검측적령민도현저고우인물표기.이용건립적방법대41례림상양품진행검측,여보통PCR검측결과부합솔위97.6％～100％.해방법적건립위기출연구화림상응용제공료기술평태.
