中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2007年
2期
176-179
,共4页
王阶平%颜江华%张长弓%王勇军%庄国洪
王階平%顏江華%張長弓%王勇軍%莊國洪
왕계평%안강화%장장궁%왕용군%장국홍
单域抗体%同源聚合体%结合价%功能性亲和力
單域抗體%同源聚閤體%結閤價%功能性親和力
단역항체%동원취합체%결합개%공능성친화력
目的 为提高人源化的抗人肺癌单域抗体hu3D3VH的功能性亲和力,制备其二价和四价的抗体分子.方法 重组PCR分别将SV5-Cys短肽和p53四聚化结构域基因与hu3D3VH基因融合,而获得同源二聚体dihu3D3VH和同源四聚体tehu3D3VH基因.将两种基因克隆至pET-22b(+)表达载体,并分别在E.coli BL21(DE3)中表达.表达产物通过N2+亲和层析柱纯化.用FITC分别标记hu3D3VH、dihu3D3VH和tehu3D3VH三种抗体分子,通过免疫荧光实验分析其抗原反应性和特异性,并利用流式细胞术比较分析其功能性亲和力.结果 两种基因均以单体形式并主要以包涵体的形式表达,纯化并复性后,其蛋白溶液中分别存在约50%的二聚体和70%的四聚体.dihu3D3VH和tehu3D3VH均保留了hu3D3VH的抗原反应性和特异性;且与hu3D3VH相比,其功能性亲和力分别提高了约60%和160%.结论 采用增加结合价的策略,有效地改善了hu3D3VH的功能性亲和力.
目的 為提高人源化的抗人肺癌單域抗體hu3D3VH的功能性親和力,製備其二價和四價的抗體分子.方法 重組PCR分彆將SV5-Cys短肽和p53四聚化結構域基因與hu3D3VH基因融閤,而穫得同源二聚體dihu3D3VH和同源四聚體tehu3D3VH基因.將兩種基因剋隆至pET-22b(+)錶達載體,併分彆在E.coli BL21(DE3)中錶達.錶達產物通過N2+親和層析柱純化.用FITC分彆標記hu3D3VH、dihu3D3VH和tehu3D3VH三種抗體分子,通過免疫熒光實驗分析其抗原反應性和特異性,併利用流式細胞術比較分析其功能性親和力.結果 兩種基因均以單體形式併主要以包涵體的形式錶達,純化併複性後,其蛋白溶液中分彆存在約50%的二聚體和70%的四聚體.dihu3D3VH和tehu3D3VH均保留瞭hu3D3VH的抗原反應性和特異性;且與hu3D3VH相比,其功能性親和力分彆提高瞭約60%和160%.結論 採用增加結閤價的策略,有效地改善瞭hu3D3VH的功能性親和力.
목적 위제고인원화적항인폐암단역항체hu3D3VH적공능성친화력,제비기이개화사개적항체분자.방법 중조PCR분별장SV5-Cys단태화p53사취화결구역기인여hu3D3VH기인융합,이획득동원이취체dihu3D3VH화동원사취체tehu3D3VH기인.장량충기인극륭지pET-22b(+)표체재체,병분별재E.coli BL21(DE3)중표체.표체산물통과N2+친화층석주순화.용FITC분별표기hu3D3VH、dihu3D3VH화tehu3D3VH삼충항체분자,통과면역형광실험분석기항원반응성화특이성,병이용류식세포술비교분석기공능성친화력.결과 량충기인균이단체형식병주요이포함체적형식표체,순화병복성후,기단백용액중분별존재약50%적이취체화70%적사취체.dihu3D3VH화tehu3D3VH균보류료hu3D3VH적항원반응성화특이성;차여hu3D3VH상비,기공능성친화력분별제고료약60%화160%.결론 채용증가결합개적책략,유효지개선료hu3D3VH적공능성친화력.
