中华外科杂志
中華外科雜誌
중화외과잡지
CHINESE JOURNAL OF SURGERY
2002年
5期
379-382
,共4页
蔡善保%马庆军%余希杰%党耕町%马大龙
蔡善保%馬慶軍%餘希傑%黨耕町%馬大龍
채선보%마경군%여희걸%당경정%마대룡
内皮生长因子%血管%腺病毒,人%基因疗法%骨髓基质细胞
內皮生長因子%血管%腺病毒,人%基因療法%骨髓基質細胞
내피생장인자%혈관%선병독,인%기인요법%골수기질세포
目的构建人VEGF121 腺病毒表达载体,探讨应用血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因治疗骨科缺血性疾患的可行性. 方法采用分子克隆技术,从pCDI/VEGF121质粒获得hVEGF121cDNA,经穿梭质粒pShuttle克隆到腺病毒质粒上,构成Adeno-VEGF121腺病毒重组质粒,经酶切及测序鉴定正确后,包装成为重组Adeno-VEGF121腺病毒,并进行电镜观察及滴度测定.用病毒感染小鼠骨髓基质细胞,用逆转录PCR方法检测VEGF121 基因在骨髓基质细胞中的转录,用免疫印迹及免疫组化方法检测VEGF蛋白的表达. 结果经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功,电镜显示包装细胞中有病毒存在,包装的病毒滴度为8×1010 pfu/ml,RT-PCR证实有VEGF121 mRNA的转录,免疫印迹及免疫组化检测有VEGF121蛋白的表达,而对照未见VEGF121转录和表达. 结论构建的VEGF121腺病毒表达载体可在体外表达,VEGF基因治疗有可能用于骨科缺血性疾患.
目的構建人VEGF121 腺病毒錶達載體,探討應用血管內皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因治療骨科缺血性疾患的可行性. 方法採用分子剋隆技術,從pCDI/VEGF121質粒穫得hVEGF121cDNA,經穿梭質粒pShuttle剋隆到腺病毒質粒上,構成Adeno-VEGF121腺病毒重組質粒,經酶切及測序鑒定正確後,包裝成為重組Adeno-VEGF121腺病毒,併進行電鏡觀察及滴度測定.用病毒感染小鼠骨髓基質細胞,用逆轉錄PCR方法檢測VEGF121 基因在骨髓基質細胞中的轉錄,用免疫印跡及免疫組化方法檢測VEGF蛋白的錶達. 結果經酶切鑒定及基因測序證實重組腺病毒質粒構建成功,電鏡顯示包裝細胞中有病毒存在,包裝的病毒滴度為8×1010 pfu/ml,RT-PCR證實有VEGF121 mRNA的轉錄,免疫印跡及免疫組化檢測有VEGF121蛋白的錶達,而對照未見VEGF121轉錄和錶達. 結論構建的VEGF121腺病毒錶達載體可在體外錶達,VEGF基因治療有可能用于骨科缺血性疾患.
목적구건인VEGF121 선병독표체재체,탐토응용혈관내피세포생장인자(vascular endothelial growth factor,VEGF)기인치료골과결혈성질환적가행성. 방법채용분자극륭기술,종pCDI/VEGF121질립획득hVEGF121cDNA,경천사질립pShuttle극륭도선병독질립상,구성Adeno-VEGF121선병독중조질립,경매절급측서감정정학후,포장성위중조Adeno-VEGF121선병독,병진행전경관찰급적도측정.용병독감염소서골수기질세포,용역전록PCR방법검측VEGF121 기인재골수기질세포중적전록,용면역인적급면역조화방법검측VEGF단백적표체. 결과경매절감정급기인측서증실중조선병독질립구건성공,전경현시포장세포중유병독존재,포장적병독적도위8×1010 pfu/ml,RT-PCR증실유VEGF121 mRNA적전록,면역인적급면역조화검측유VEGF121단백적표체,이대조미견VEGF121전록화표체. 결론구건적VEGF121선병독표체재체가재체외표체,VEGF기인치료유가능용우골과결혈성질환.
