医药前沿
醫藥前沿
의약전연
YIAYAO QIANYAN
2012年
11期
153-154
,共2页
龚青%徐进文%徐祖敏%高国全
龔青%徐進文%徐祖敏%高國全
공청%서진문%서조민%고국전
载体%FasL%RNAi
載體%FasL%RNAi
재체%FasL%RNAi
目的 构建细胞凋亡受体通路相关蛋白FasL表达的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供稳定转染细胞的RNA干扰质粒.方法 选取FasL基因的19nt特异性序列,设计针对FasL的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体中,EcoR I和Apa I进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下包含FasL基因RNAi的重组载体转染脐静脉血管内皮细胞,转染48h后,收集细胞裂解液,Western blotting分析对照组与转染组FasL蛋白的表达水平.结果 双酶切证实shRNA正确插入pSilencer 1.0-U6质粒,DNA 测序证实插入的序列正确; FasL基因RNAi的载体转染血管内皮细胞成功; Western blotting结果 显示与空质粒对照组比转染组细胞FasL表达下调.结论 成功构建人FasL基因RNAi质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供了稳定的转染细胞载体.
目的 構建細胞凋亡受體通路相關蛋白FasL錶達的RNA榦擾(RNAi)質粒,為研究FasL參與的細胞信號通路提供穩定轉染細胞的RNA榦擾質粒.方法 選取FasL基因的19nt特異性序列,設計針對FasL的shRNA序列,應用基因重組技術剋隆到pSilencer 1.0-U6錶達載體中,EcoR I和Apa I進行雙酶切和DNA測序鑒定重組剋隆,在脂質體的介導下包含FasL基因RNAi的重組載體轉染臍靜脈血管內皮細胞,轉染48h後,收集細胞裂解液,Western blotting分析對照組與轉染組FasL蛋白的錶達水平.結果 雙酶切證實shRNA正確插入pSilencer 1.0-U6質粒,DNA 測序證實插入的序列正確; FasL基因RNAi的載體轉染血管內皮細胞成功; Western blotting結果 顯示與空質粒對照組比轉染組細胞FasL錶達下調.結論 成功構建人FasL基因RNAi質粒,為研究FasL參與的細胞信號通路提供瞭穩定的轉染細胞載體.
목적 구건세포조망수체통로상관단백FasL표체적RNA간우(RNAi)질립,위연구FasL삼여적세포신호통로제공은정전염세포적RNA간우질립.방법 선취FasL기인적19nt특이성서렬,설계침대FasL적shRNA서렬,응용기인중조기술극륭도pSilencer 1.0-U6표체재체중,EcoR I화Apa I진행쌍매절화DNA측서감정중조극륭,재지질체적개도하포함FasL기인RNAi적중조재체전염제정맥혈관내피세포,전염48h후,수집세포렬해액,Western blotting분석대조조여전염조FasL단백적표체수평.결과 쌍매절증실shRNA정학삽입pSilencer 1.0-U6질립,DNA 측서증실삽입적서렬정학; FasL기인RNAi적재체전염혈관내피세포성공; Western blotting결과 현시여공질립대조조비전염조세포FasL표체하조.결론 성공구건인FasL기인RNAi질립,위연구FasL삼여적세포신호통로제공료은정적전염세포재체.
