基因组学与应用生物学
基因組學與應用生物學
기인조학여응용생물학
GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
2012年
4期
355-359
,共5页
陈自洪%韦珏%孟凡丽%陆凤花%崔奎青%石德顺
陳自洪%韋玨%孟凡麗%陸鳳花%崔奎青%石德順
진자홍%위각%맹범려%륙봉화%최규청%석덕순
水牛%ICSI介导转基因%激活
水牛%ICSI介導轉基因%激活
수우%ICSI개도전기인%격활
本研究探讨了不同激活方法对水牛ICSI介导转基因效果的影响.水牛体外成熟卵进行ICSI介导转基因(ICSI-mediated gene transfer,ICSI-Tr)操作后,先用5 μmol/L的离子霉素(ionomycin,Ion)激活处理5 min,然后分成3组,再分别用10 μg/mL放线菌酮(cycloheximide,CHX)培养5 h (CHX5h组)、10 μg/mL CHX培养3 h后再用2 mmol/L的二甲氨基嘌呤(6-DMAP)培养2 h (CHX3h-DMAP2h组)或用培养液(CM)培养3 h后再用2 mmol/L 6-DMAP培养2 h (CM3h-DMAP2h组).结果显示,CHX5h组的分裂率、早期胚胎基因表达率和囊胚发育率最高,且显著高于CM3h-DMAP2h组(66.7%比49.5%,p<0.05; 66.7%比40.0%,p<0.01; 22.2%比9.9%,p<0.05).ICSI 18 h后检查原核形成率,发现CHX5h和CHX3h-DMAP2h处理组的完整精子头百分率显著低于CM3h-DMAP2h处理组(p<0.05),2原核(pronucleus,PN)百分率则显著提高(42.4%比23.8%,p<0.05; 44.6%比23.8%,p<0.01).以上结果表明,在水牛ICSI介导转基因时,Ion联合CHX较Ion联合6-DMAP激活重构胚效果好.
本研究探討瞭不同激活方法對水牛ICSI介導轉基因效果的影響.水牛體外成熟卵進行ICSI介導轉基因(ICSI-mediated gene transfer,ICSI-Tr)操作後,先用5 μmol/L的離子黴素(ionomycin,Ion)激活處理5 min,然後分成3組,再分彆用10 μg/mL放線菌酮(cycloheximide,CHX)培養5 h (CHX5h組)、10 μg/mL CHX培養3 h後再用2 mmol/L的二甲氨基嘌呤(6-DMAP)培養2 h (CHX3h-DMAP2h組)或用培養液(CM)培養3 h後再用2 mmol/L 6-DMAP培養2 h (CM3h-DMAP2h組).結果顯示,CHX5h組的分裂率、早期胚胎基因錶達率和囊胚髮育率最高,且顯著高于CM3h-DMAP2h組(66.7%比49.5%,p<0.05; 66.7%比40.0%,p<0.01; 22.2%比9.9%,p<0.05).ICSI 18 h後檢查原覈形成率,髮現CHX5h和CHX3h-DMAP2h處理組的完整精子頭百分率顯著低于CM3h-DMAP2h處理組(p<0.05),2原覈(pronucleus,PN)百分率則顯著提高(42.4%比23.8%,p<0.05; 44.6%比23.8%,p<0.01).以上結果錶明,在水牛ICSI介導轉基因時,Ion聯閤CHX較Ion聯閤6-DMAP激活重構胚效果好.
본연구탐토료불동격활방법대수우ICSI개도전기인효과적영향.수우체외성숙란진행ICSI개도전기인(ICSI-mediated gene transfer,ICSI-Tr)조작후,선용5 μmol/L적리자매소(ionomycin,Ion)격활처리5 min,연후분성3조,재분별용10 μg/mL방선균동(cycloheximide,CHX)배양5 h (CHX5h조)、10 μg/mL CHX배양3 h후재용2 mmol/L적이갑안기표령(6-DMAP)배양2 h (CHX3h-DMAP2h조)혹용배양액(CM)배양3 h후재용2 mmol/L 6-DMAP배양2 h (CM3h-DMAP2h조).결과현시,CHX5h조적분렬솔、조기배태기인표체솔화낭배발육솔최고,차현저고우CM3h-DMAP2h조(66.7%비49.5%,p<0.05; 66.7%비40.0%,p<0.01; 22.2%비9.9%,p<0.05).ICSI 18 h후검사원핵형성솔,발현CHX5h화CHX3h-DMAP2h처리조적완정정자두백분솔현저저우CM3h-DMAP2h처리조(p<0.05),2원핵(pronucleus,PN)백분솔칙현저제고(42.4%비23.8%,p<0.05; 44.6%비23.8%,p<0.01).이상결과표명,재수우ICSI개도전기인시,Ion연합CHX교Ion연합6-DMAP격활중구배효과호.
