CAJ | 학술논문

目的:构建蓖麻毒素(RIC)、相思子毒素(ABR)A链突变体的嵌合体蛋白,实现嵌合体蛋白的可溶性表达、纯化及杭原性分析.方法:采用柔性linker连接RICA链突变体(mRICAD75AV76MY80A)和ABR A链突变体(mABRAE164AR167L),构建嵌合体基因mRICA/mABRA,将该嵌合体基因亚克隆至原核载体pQE80L构建表达质粒pQE80L-mRICA/mABRA,再转化至大肠杆菌M15获得表达工程菌株M15/pQE80L-mRICA/mABRA,工程菌在18℃经0.1mmol/L的IPTG诱导14h,表达的嵌合体蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化,通过ELISA和Western印迹检测嵌合体蛋白的抗原性.结果:所获得的mRICA/mABRA嵌合体基因经一致性比对分析,与预计嵌合基因的序列一致性为100%,其开放读框全长1572bp,编码524个氨基酸残基;重组表达质粒PQE80L-mRICA/mABRA经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,嵌合体蛋白相对分子质量约为62x103,与预测相符,可溶性的嵌合体蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化,纯度可达99%;间接ELISA和Western印迹结果表明,嵌合体蛋白能同时与抗RIC多克隆抗体和杭ABR多克隆抗体发生特异的抗原抗体反应.结论:得到的mRICA/mABRA嵌合体蛋白具有良好的抗原性,为研制新型RIC和ABR双价疫苗奠定了重要基础.
목적:구건비마독소(RIC)、상사자독소(ABR)A련돌변체적감합체단백,실현감합체단백적가용성표체、순화급항원성분석.방법:채용유성linker련접RICA련돌변체(mRICAD75AV76MY80A)화ABR A련돌변체(mABRAE164AR167L),구건감합체기인mRICA/mABRA,장해감합체기인아극륭지원핵재체pQE80L구건표체질립pQE80L-mRICA/mABRA,재전화지대장간균M15획득표체공정균주M15/pQE80L-mRICA/mABRA,공정균재18℃경0.1mmol/L적IPTG유도14h,표체적감합체단백경Ni-NTA친화층석주순화,통과ELISA화Western인적검측감합체단백적항원성.결과:소획득적mRICA/mABRA감합체기인경일치성비대분석,여예계감합기인적서렬일치성위100%,기개방독광전장1572bp,편마524개안기산잔기;중조표체질립PQE80L-mRICA/mABRA경PCR급쌍매절감정증명구건정학,감합체단백상대분자질량약위62x103,여예측상부,가용성적감합체단백경Ni-NTA친화층석주순화,순도가체99%;간접ELISA화Western인적결과표명,감합체단백능동시여항RIC다극륭항체화항ABR다극륭항체발생특이적항원항체반응.결론:득도적mRICA/mABRA감합체단백구유량호적항원성,위연제신형RIC화ABR쌍개역묘전정료중요기출.