医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2011年
3期
204-209
,共6页
钱宝鑫%朱梦瑜%高星杰%刘欣%苏超%付晓%王保亚%王鑫廷%杨洁
錢寶鑫%硃夢瑜%高星傑%劉訢%囌超%付曉%王保亞%王鑫廷%楊潔
전보흠%주몽유%고성걸%류흔%소초%부효%왕보아%왕흠정%양길
人类Tudor-SN蛋白%SN5%pEGFP-C2%结构预测%拼接%重组质粒%融合蛋白
人類Tudor-SN蛋白%SN5%pEGFP-C2%結構預測%拼接%重組質粒%融閤蛋白
인류Tudor-SN단백%SN5%pEGFP-C2%결구예측%병접%중조질립%융합단백
目的 实现Tudor-SN蛋白TSN结构域内间断的SN5基因片段(SN5α、SN5β)的拼接以及与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中的融合表达.方法 利用Geno 3D对拼接的SN5进行结构预测.以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR分别扩增出SN5α和SN5β的基因,双酶切并纯化后,先将SN5β引入pEGFP-C2,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5β,再将SN5α引入pEGFP-C2-SN5β,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5.将pEGFP-C2-SN5β/ SN5脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达.结果 ① 拼接的SN5结构预测显示与TSN完整结构中的SN5高度重合;②对重组质粒进行双酶切鉴定可见SN5α、SN5β、SN5的cDNA片段;③ 转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达;④ Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白.结论 pEGFP-C2-SN5/SN5β重组质粒构建成功,SN5α和SN5β在pEGFP-C2中实现了顺序拼接;目的片段可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达,融合蛋白可与抗GFP抗体结合用于蛋白检测.
目的 實現Tudor-SN蛋白TSN結構域內間斷的SN5基因片段(SN5α、SN5β)的拼接以及與綠色熒光蛋白在HeLa細胞中的融閤錶達.方法 利用Geno 3D對拼接的SN5進行結構預測.以重組質粒pSG5-Tudor-SN-flag為模闆,PCR分彆擴增齣SN5α和SN5β的基因,雙酶切併純化後,先將SN5β引入pEGFP-C2,完成重組質粒pEGFP-C2-SN5β,再將SN5α引入pEGFP-C2-SN5β,完成重組質粒pEGFP-C2-SN5.將pEGFP-C2-SN5β/ SN5脂質體法轉染HeLa細胞,熒光顯微鏡下觀察融閤蛋白的熒光錶達情況,Western印跡檢測融閤蛋白的錶達.結果 ① 拼接的SN5結構預測顯示與TSN完整結構中的SN5高度重閤;②對重組質粒進行雙酶切鑒定可見SN5α、SN5β、SN5的cDNA片段;③ 轉染重組質粒後可觀察到綠色熒光蛋白的錶達;④ Western印跡後可在相應位置檢測到融閤蛋白.結論 pEGFP-C2-SN5/SN5β重組質粒構建成功,SN5α和SN5β在pEGFP-C2中實現瞭順序拼接;目的片段可與綠色熒光蛋白在HeLa細胞中融閤錶達,融閤蛋白可與抗GFP抗體結閤用于蛋白檢測.
목적 실현Tudor-SN단백TSN결구역내간단적SN5기인편단(SN5α、SN5β)적병접이급여록색형광단백재HeLa세포중적융합표체.방법 이용Geno 3D대병접적SN5진행결구예측.이중조질립pSG5-Tudor-SN-flag위모판,PCR분별확증출SN5α화SN5β적기인,쌍매절병순화후,선장SN5β인입pEGFP-C2,완성중조질립pEGFP-C2-SN5β,재장SN5α인입pEGFP-C2-SN5β,완성중조질립pEGFP-C2-SN5.장pEGFP-C2-SN5β/ SN5지질체법전염HeLa세포,형광현미경하관찰융합단백적형광표체정황,Western인적검측융합단백적표체.결과 ① 병접적SN5결구예측현시여TSN완정결구중적SN5고도중합;②대중조질립진행쌍매절감정가견SN5α、SN5β、SN5적cDNA편단;③ 전염중조질립후가관찰도록색형광단백적표체;④ Western인적후가재상응위치검측도융합단백.결론 pEGFP-C2-SN5/SN5β중조질립구건성공,SN5α화SN5β재pEGFP-C2중실현료순서병접;목적편단가여록색형광단백재HeLa세포중융합표체,융합단백가여항GFP항체결합용우단백검측.
