福建医药杂志
福建醫藥雜誌
복건의약잡지
FUJIAN MEDICAL JOURNAL
2011年
2期
12-16
,共5页
王坤%薛士杰%金静君%何萍%赖力
王坤%薛士傑%金靜君%何萍%賴力
왕곤%설사걸%금정군%하평%뢰력
Blys%CTLA4-Ig%Th表位%融合蛋白
Blys%CTLA4-Ig%Th錶位%融閤蛋白
Blys%CTLA4-Ig%Th표위%융합단백
目的 构建异源性Th表位修饰的CTLA4-Ig-msBlys的原核表达质粒,并在E.coli BL21中诱导融合蛋白表达,初步检测蛋白特性.方法 采用PCR法从质粒pCMV-sBlys扩增sBlys片段,将与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th 表位重组后的msBlys连接CTLA4-Ig片段,克隆人pGEX-KG原核表达载体,用LB固体培养基抗生素筛选、酶切并经琼脂糖凝胶电泳鉴定;将质粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys转入E.coli BL21菌株中,实现插人基因的融合表达,用SDS-PAGE 和Western blot检测表达产物.结果 pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys构建正确且最终转人E.coli BL21,得到融合蛋白的表达;CTLA4-Ig-msBlys融合蛋白在E.coli中获得表达,表达产物的相对分子质量同预期值一致.结论成功构建原核表达质粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys,并在E.coli BL21表达CTLA4-Ig-msBlys融合蛋白,为下一步探讨Blys在自身免疫性疾病患者的治疗作用莫定了基础.
目的 構建異源性Th錶位脩飾的CTLA4-Ig-msBlys的原覈錶達質粒,併在E.coli BL21中誘導融閤蛋白錶達,初步檢測蛋白特性.方法 採用PCR法從質粒pCMV-sBlys擴增sBlys片段,將與卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th 錶位重組後的msBlys連接CTLA4-Ig片段,剋隆人pGEX-KG原覈錶達載體,用LB固體培養基抗生素篩選、酶切併經瓊脂糖凝膠電泳鑒定;將質粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys轉入E.coli BL21菌株中,實現插人基因的融閤錶達,用SDS-PAGE 和Western blot檢測錶達產物.結果 pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys構建正確且最終轉人E.coli BL21,得到融閤蛋白的錶達;CTLA4-Ig-msBlys融閤蛋白在E.coli中穫得錶達,錶達產物的相對分子質量同預期值一緻.結論成功構建原覈錶達質粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys,併在E.coli BL21錶達CTLA4-Ig-msBlys融閤蛋白,為下一步探討Blys在自身免疫性疾病患者的治療作用莫定瞭基礎.
목적 구건이원성Th표위수식적CTLA4-Ig-msBlys적원핵표체질립,병재E.coli BL21중유도융합단백표체,초보검측단백특성.방법 채용PCR법종질립pCMV-sBlys확증sBlys편단,장여란청단백(ovalbumin,OVA)Th 표위중조후적msBlys련접CTLA4-Ig편단,극륭인pGEX-KG원핵표체재체,용LB고체배양기항생소사선、매절병경경지당응효전영감정;장질립pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys전입E.coli BL21균주중,실현삽인기인적융합표체,용SDS-PAGE 화Western blot검측표체산물.결과 pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys구건정학차최종전인E.coli BL21,득도융합단백적표체;CTLA4-Ig-msBlys융합단백재E.coli중획득표체,표체산물적상대분자질량동예기치일치.결론성공구건원핵표체질립pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys,병재E.coli BL21표체CTLA4-Ig-msBlys융합단백,위하일보탐토Blys재자신면역성질병환자적치료작용막정료기출.
