海峡药学
海峽藥學
해협약학
STRAIT PHARMACEUTICAL JOURNAL
2010年
4期
164-166
,共3页
张南燕%洪文荣%林玉双%樊伟明
張南燕%洪文榮%林玉雙%樊偉明
장남연%홍문영%림옥쌍%번위명
基因打靶%金色链霉菌%氯霉素抗性基因
基因打靶%金色鏈黴菌%氯黴素抗性基因
기인타파%금색련매균%록매소항성기인
目的 利用pIJ790,pIJ773和pUC19等基本质粒,构建金色链霉茵基因打靶筛选体系所需质粒pIJ792.方法 以质粒pIJ790为模板,将PCR扩增的cat基因片段插入到pMD19-T的多克隆位点,得重组质粒pFD31.EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切pIJ773,其小片段与pUC19经同样双酶切后的片段酶连克隆,得新质粒pFD32.pFD31和pFD32再分剐经Sac Ⅰ酶切,将pFD31含Cat的小片段和pFD32的大片段酶连克隆,筛选得重组质粒pFD33,EcoR Ⅰ与Hind Ⅲ酶切,将切下的两个小片段与pIJ773经同样双酶切后的大片段进行酶连克隆,最终得筛选质粒pIJ792.结果 新质拉pIJ792的抗氯霉素能力超过150λg·mL-1.结论 pIJ792可满足金色链霉菌基因打靶的筛选需要,实现了用于金色链霉菌PCR基因打靶所需筛选体系的构建.
目的 利用pIJ790,pIJ773和pUC19等基本質粒,構建金色鏈黴茵基因打靶篩選體繫所需質粒pIJ792.方法 以質粒pIJ790為模闆,將PCR擴增的cat基因片段插入到pMD19-T的多剋隆位點,得重組質粒pFD31.EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切pIJ773,其小片段與pUC19經同樣雙酶切後的片段酶連剋隆,得新質粒pFD32.pFD31和pFD32再分剮經Sac Ⅰ酶切,將pFD31含Cat的小片段和pFD32的大片段酶連剋隆,篩選得重組質粒pFD33,EcoR Ⅰ與Hind Ⅲ酶切,將切下的兩箇小片段與pIJ773經同樣雙酶切後的大片段進行酶連剋隆,最終得篩選質粒pIJ792.結果 新質拉pIJ792的抗氯黴素能力超過150λg·mL-1.結論 pIJ792可滿足金色鏈黴菌基因打靶的篩選需要,實現瞭用于金色鏈黴菌PCR基因打靶所需篩選體繫的構建.
목적 이용pIJ790,pIJ773화pUC19등기본질립,구건금색련매인기인타파사선체계소수질립pIJ792.방법 이질립pIJ790위모판,장PCR확증적cat기인편단삽입도pMD19-T적다극륭위점,득중조질립pFD31.EcoR Ⅰ화Hind Ⅲ쌍매절pIJ773,기소편단여pUC19경동양쌍매절후적편단매련극륭,득신질립pFD32.pFD31화pFD32재분과경Sac Ⅰ매절,장pFD31함Cat적소편단화pFD32적대편단매련극륭,사선득중조질립pFD33,EcoR Ⅰ여Hind Ⅲ매절,장절하적량개소편단여pIJ773경동양쌍매절후적대편단진행매련극륭,최종득사선질립pIJ792.결과 신질랍pIJ792적항록매소능력초과150λg·mL-1.결론 pIJ792가만족금색련매균기인타파적사선수요,실현료용우금색련매균PCR기인타파소수사선체계적구건.
