CAJ | 학술논문

人C型凝集素样受体(human C-type lectin-like receptor-2,hCLEC-2)是新克隆的Ⅱ型跨膜受体分子,研究表明,它在病毒感染,血小板活化、聚集,肿瘤转移和信号转导等方面发挥重要作用.通过制备针对其胞外段糖类识别结构域(CRD)的抗体来进一步研究该蛋白质的生物学功能及相关信号通路.构建了pET23b-CRD重组表达质粒,将其转化到大肠杆菌BL21中,用于hCLEC-2-CRD-His融合蛋白的表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表明,融合重组蛋白成功获得了高效表达,分子质量在18 ku左右.经鉴定,发现hCLEC-2-CRD-His表达于包涵体中.为获得高纯度的可溶性蛋白,将包涵体溶于6 mol/L盐酸胍,并用镍柱进行纯化.纯化后的蛋白质经过透析、再折叠后作为抗原,免疫家兔制备抗血清,抗血清经蛋白G亲合层析纯化后用westem blot等方法进行鉴定,结果显示该抗体能特异性地检测到GFP-hCLEC-2和GFP-CRD.通过使用该抗体,进一步发现,在用PMA和IL-4诱导单核细胞THP-1分化的过程中,内源性hCLEC-2蛋白水半下调,初步揭示了hCLEC-2的表达和单核细胞的分化存在一定的联系.因此,该抗体的成功制备将为进一步研究CLEC-2的生物学功能提供有利的条件.
인C형응집소양수체(human C-type lectin-like receptor-2,hCLEC-2)시신극륭적Ⅱ형과막수체분자,연구표명,타재병독감염,혈소판활화、취집,종류전이화신호전도등방면발휘중요작용.통과제비침대기포외단당류식별결구역(CRD)적항체래진일보연구해단백질적생물학공능급상관신호통로.구건료pET23b-CRD중조표체질립,장기전화도대장간균BL21중,용우hCLEC-2-CRD-His융합단백적표체,경취병희선알응효전영검측표명,융합중조단백성공획득료고효표체,분자질량재18 ku좌우.경감정,발현hCLEC-2-CRD-His표체우포함체중.위획득고순도적가용성단백,장포함체용우6 mol/L염산고,병용얼주진행순화.순화후적단백질경과투석、재절첩후작위항원,면역가토제비항혈청,항혈청경단백G친합층석순화후용westem blot등방법진행감정,결과현시해항체능특이성지검측도GFP-hCLEC-2화GFP-CRD.통과사용해항체,진일보발현,재용PMA화IL-4유도단핵세포THP-1분화적과정중,내원성hCLEC-2단백수반하조,초보게시료hCLEC-2적표체화단핵세포적분화존재일정적련계.인차,해항체적성공제비장위진일보연구CLEC-2적생물학공능제공유리적조건.