生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2008年
6期
38-41
,共4页
姚世响%谷丽丽%张霞%李秀明%油天钰%兰海燕%张富春
姚世響%穀麗麗%張霞%李秀明%油天鈺%蘭海燕%張富春
요세향%곡려려%장하%리수명%유천옥%란해연%장부춘
灰绿藜%RNA提取%SDS-LiCl法%TRIZOL试剂法%全长cDNA文库%抑制消减文库
灰綠藜%RNA提取%SDS-LiCl法%TRIZOL試劑法%全長cDNA文庫%抑製消減文庫
회록려%RNA제취%SDS-LiCl법%TRIZOL시제법%전장cDNA문고%억제소감문고
目的:为分离灰绿藜耐盐相关新基因,构建叶片cDNA文库,探索从盐生植物中提取高质量RNA的方法.方法:以灰绿藜叶片为材料,应用RNA Plant Reagent法(Tiangen)、Plant RNA purification Reagent法(Invitrogen)、UNIQ柱式总RNA试剂盒提取法(Sangon)、SDS-LiCl法、TRIZOL试剂法(Invitrogen)等进行总RNA的提取,并构建其全长cDNA文库和抑制消减文库.结果:RNAPlant-Reagent法、Plant RNA purification Reagent法和UNIQ柱式总RNA试剂盒提取法获得的RNA完整性均不好;SDS-LiCl法提取的RNA完整性好(28S条带亮度是18S的2倍、条带锐利清晰)、纯度高(A280/A260为1.89±0.03,A260/A230为2.23±0.02),适合用于直接反转录及构建全长cDNA文库,并获得成功;TRIZOL试剂法简单快捷,产率高(2724±82μg/g),完整性较好,可经mRNA纯化后用于抑制消减文库的构建并获得成功.结论:建立了用于构建高质量cDNA文库的灰绿藜RNA的制备方法.
目的:為分離灰綠藜耐鹽相關新基因,構建葉片cDNA文庫,探索從鹽生植物中提取高質量RNA的方法.方法:以灰綠藜葉片為材料,應用RNA Plant Reagent法(Tiangen)、Plant RNA purification Reagent法(Invitrogen)、UNIQ柱式總RNA試劑盒提取法(Sangon)、SDS-LiCl法、TRIZOL試劑法(Invitrogen)等進行總RNA的提取,併構建其全長cDNA文庫和抑製消減文庫.結果:RNAPlant-Reagent法、Plant RNA purification Reagent法和UNIQ柱式總RNA試劑盒提取法穫得的RNA完整性均不好;SDS-LiCl法提取的RNA完整性好(28S條帶亮度是18S的2倍、條帶銳利清晰)、純度高(A280/A260為1.89±0.03,A260/A230為2.23±0.02),適閤用于直接反轉錄及構建全長cDNA文庫,併穫得成功;TRIZOL試劑法簡單快捷,產率高(2724±82μg/g),完整性較好,可經mRNA純化後用于抑製消減文庫的構建併穫得成功.結論:建立瞭用于構建高質量cDNA文庫的灰綠藜RNA的製備方法.
목적:위분리회록려내염상관신기인,구건협편cDNA문고,탐색종염생식물중제취고질량RNA적방법.방법:이회록려협편위재료,응용RNA Plant Reagent법(Tiangen)、Plant RNA purification Reagent법(Invitrogen)、UNIQ주식총RNA시제합제취법(Sangon)、SDS-LiCl법、TRIZOL시제법(Invitrogen)등진행총RNA적제취,병구건기전장cDNA문고화억제소감문고.결과:RNAPlant-Reagent법、Plant RNA purification Reagent법화UNIQ주식총RNA시제합제취법획득적RNA완정성균불호;SDS-LiCl법제취적RNA완정성호(28S조대량도시18S적2배、조대예리청석)、순도고(A280/A260위1.89±0.03,A260/A230위2.23±0.02),괄합용우직접반전록급구건전장cDNA문고,병획득성공;TRIZOL시제법간단쾌첩,산솔고(2724±82μg/g),완정성교호,가경mRNA순화후용우억제소감문고적구건병획득성공.결론:건립료용우구건고질량cDNA문고적회록려RNA적제비방법.
