遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2008年
10期
1363-1371
,共9页
刘明坤%刘关君%魏志刚%阎秀峰%曲春浦%王垠%刘桂丰%杨传平
劉明坤%劉關君%魏誌剛%閻秀峰%麯春浦%王垠%劉桂豐%楊傳平
류명곤%류관군%위지강%염수봉%곡춘포%왕은%류계봉%양전평
半胱氨酸合成酶%西伯利亚蓼%定量RT-PCR%表达分析
半胱氨痠閤成酶%西伯利亞蓼%定量RT-PCR%錶達分析
반광안산합성매%서백리아료%정량RT-PCR%표체분석
半胱氨酸合成酶是植物半胱氨酸合成反应的关键限速酶.文中应用RACE技术从西伯利亚蓼中成功克隆了半胱氨酸合成酶基因(GenBank登录号:EU597481),命名为PcCSasel,该基因全长cDNA为1 260 bp,编码382个氨基酸.经生物信息学分析,初步确定PcCSasel的N端前16个氨基酸为信号肽,并引导PcCSasel蛋白定位于胞质,为胞质型半胱氨酸合成酶.同源序列分析表明,此蛋白与其他植物半胱氨酸合成酶成熟蛋白序列高度保守,氨基酸相似性达到90%左右.荧光定量RT-PCR分析表明,PcCSasel在西伯利亚蓼的叶、茎和地下茎中均有表达,叶中表达最高,茎和地下茎次之,在3%NaHC03胁迫过程中,该基因在叶、茎和地下茎中均在第2 d表达量最高.将PcCSasel转入酿酒酵母INVScl,结果显示培养基中半胱氨酸和菌体中谷胱甘肽含量均有显著增加,在10%NaHC03和5 mol/L NaCI胁迫下,转基因INVScl-pYES2-PcCSasel菌株的存活率明显高于对照INVScl-pYES2,证明PcCSasel基因具有耐高盐的作用.
半胱氨痠閤成酶是植物半胱氨痠閤成反應的關鍵限速酶.文中應用RACE技術從西伯利亞蓼中成功剋隆瞭半胱氨痠閤成酶基因(GenBank登錄號:EU597481),命名為PcCSasel,該基因全長cDNA為1 260 bp,編碼382箇氨基痠.經生物信息學分析,初步確定PcCSasel的N耑前16箇氨基痠為信號肽,併引導PcCSasel蛋白定位于胞質,為胞質型半胱氨痠閤成酶.同源序列分析錶明,此蛋白與其他植物半胱氨痠閤成酶成熟蛋白序列高度保守,氨基痠相似性達到90%左右.熒光定量RT-PCR分析錶明,PcCSasel在西伯利亞蓼的葉、莖和地下莖中均有錶達,葉中錶達最高,莖和地下莖次之,在3%NaHC03脅迫過程中,該基因在葉、莖和地下莖中均在第2 d錶達量最高.將PcCSasel轉入釀酒酵母INVScl,結果顯示培養基中半胱氨痠和菌體中穀胱甘肽含量均有顯著增加,在10%NaHC03和5 mol/L NaCI脅迫下,轉基因INVScl-pYES2-PcCSasel菌株的存活率明顯高于對照INVScl-pYES2,證明PcCSasel基因具有耐高鹽的作用.
반광안산합성매시식물반광안산합성반응적관건한속매.문중응용RACE기술종서백리아료중성공극륭료반광안산합성매기인(GenBank등록호:EU597481),명명위PcCSasel,해기인전장cDNA위1 260 bp,편마382개안기산.경생물신식학분석,초보학정PcCSasel적N단전16개안기산위신호태,병인도PcCSasel단백정위우포질,위포질형반광안산합성매.동원서렬분석표명,차단백여기타식물반광안산합성매성숙단백서렬고도보수,안기산상사성체도90%좌우.형광정량RT-PCR분석표명,PcCSasel재서백리아료적협、경화지하경중균유표체,협중표체최고,경화지하경차지,재3%NaHC03협박과정중,해기인재협、경화지하경중균재제2 d표체량최고.장PcCSasel전입양주효모INVScl,결과현시배양기중반광안산화균체중곡광감태함량균유현저증가,재10%NaHC03화5 mol/L NaCI협박하,전기인INVScl-pYES2-PcCSasel균주적존활솔명현고우대조INVScl-pYES2,증명PcCSasel기인구유내고염적작용.
