细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
2期
153-155,158
,共4页
焦海春%肖建华%何涛君%胡杰%崔彦芬
焦海春%肖建華%何濤君%鬍傑%崔彥芬
초해춘%초건화%하도군%호걸%최언분
Foxp3%CD4+CD25+Treg细胞%抗血清制备
Foxp3%CD4+CD25+Treg細胞%抗血清製備
Foxp3%CD4+CD25+Treg세포%항혈청제비
目的:制备高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并初步应用于正常小鼠组织的Foxp3表达的鉴定.方法:构建重组质粒pGEX-6p-2/Foxp3,并转化至E.coli BL21(DE3)中进行大量诱导表达,用纯化的重组融合蛋白免疫新西兰兔,制备抗血清.以制备的抗血清为一抗,Western blot检测小鼠组织的Foxp3蛋白的表达.结果:SDS-PAGE及Western blot鉴定,诱导表达及纯化的重组融合蛋白能被抗GST单克隆抗体(mAb)识别,在Mr 45 000附近有特异条带,与预期融合蛋白大小一致,获得的抗血清效价在1:12 800以上,该抗血清能特异性识别NIH3T3细胞中表达的Foxp3蛋白.Western blot鉴定结果显示在脾脏、胸腺、淋巴结中Foxp3蛋白有较高表达,胃也有少量的表达,而骨骼肌、脂肪组织未见表达.结论:制备了高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并可用于正常小鼠组织的Foxp3蛋白的表达鉴定,为进一步研究Foxp3奠定了实验基础.
目的:製備高效價的特異性小鼠Foxp3抗血清,併初步應用于正常小鼠組織的Foxp3錶達的鑒定.方法:構建重組質粒pGEX-6p-2/Foxp3,併轉化至E.coli BL21(DE3)中進行大量誘導錶達,用純化的重組融閤蛋白免疫新西蘭兔,製備抗血清.以製備的抗血清為一抗,Western blot檢測小鼠組織的Foxp3蛋白的錶達.結果:SDS-PAGE及Western blot鑒定,誘導錶達及純化的重組融閤蛋白能被抗GST單剋隆抗體(mAb)識彆,在Mr 45 000附近有特異條帶,與預期融閤蛋白大小一緻,穫得的抗血清效價在1:12 800以上,該抗血清能特異性識彆NIH3T3細胞中錶達的Foxp3蛋白.Western blot鑒定結果顯示在脾髒、胸腺、淋巴結中Foxp3蛋白有較高錶達,胃也有少量的錶達,而骨骼肌、脂肪組織未見錶達.結論:製備瞭高效價的特異性小鼠Foxp3抗血清,併可用于正常小鼠組織的Foxp3蛋白的錶達鑒定,為進一步研究Foxp3奠定瞭實驗基礎.
목적:제비고효개적특이성소서Foxp3항혈청,병초보응용우정상소서조직적Foxp3표체적감정.방법:구건중조질립pGEX-6p-2/Foxp3,병전화지E.coli BL21(DE3)중진행대량유도표체,용순화적중조융합단백면역신서란토,제비항혈청.이제비적항혈청위일항,Western blot검측소서조직적Foxp3단백적표체.결과:SDS-PAGE급Western blot감정,유도표체급순화적중조융합단백능피항GST단극륭항체(mAb)식별,재Mr 45 000부근유특이조대,여예기융합단백대소일치,획득적항혈청효개재1:12 800이상,해항혈청능특이성식별NIH3T3세포중표체적Foxp3단백.Western blot감정결과현시재비장、흉선、림파결중Foxp3단백유교고표체,위야유소량적표체,이골격기、지방조직미견표체.결론:제비료고효개적특이성소서Foxp3항혈청,병가용우정상소서조직적Foxp3단백적표체감정,위진일보연구Foxp3전정료실험기출.
