CAJ | 학술논문

背景与目的:本实验室已成功构建了质粒pTre-IFN-γ,并证实四环素基因调控系统(Tet-off system)能在体外调控人γ-干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)基因在小鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)中的表达.本实验进一步研究Tet-off系统体外调控的可逆性,以及其对小鼠MSCs中人IFN-γ基因表达的调控作用.方法:脂质体介导pTet-off和pTre-IFN-γ质粒共转染小鼠MSCs.用ELISA法检测MSCs培养液中人IFN-γ蛋白的分泌量.把共转染后的MSCs回输给BALB/c裸小鼠,用实时荧光定量RT-PCR方法检测各组BALB/c裸小鼠脾组织中的IFN-γmRNA含量.结果:用ELISA法可检测到共转染后的MSCs培养液中有IFN-γ蛋白分泌,分泌高峰在前72 h内;共转染后84 h加入含300 ng/mL盐酸四环素的培养液培养12 h,每1×107个细胞的分泌量为(67.11±22.14)pg,无四环素处理组为(319.96±29.04)pg,两组相比差异有统计学意义(P＜0.001);去除四环素后,IFN-γ蛋白分泌显著增加(P=0.032).用实时荧光定量RT-PCR可检测到回输共转染MSCs的各组BALB/c裸小鼠脾组织中均有IFN-γmRNA转录,不用四环素处理组最高,达(1.5±0.7)×105copy·(100mg)-1,定期四环素处理组为(6.9±5.3)×102 copy·(100mg)-1(P＜0.001),接受1次四环素处理组表达量介于前两者之间,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:Tet-off系统在体外和体内都可以迅速、有效地调控人IFN-γ基因在小鼠MSCs中的表达,而且调控是可逆的.
배경여목적:본실험실이성공구건료질립pTre-IFN-γ,병증실사배소기인조공계통(Tet-off system)능재체외조공인γ-간우소(interferon-gamma,IFN-γ)기인재소서골수기질세포(marrow stromal cells,MSCs)중적표체.본실험진일보연구Tet-off계통체외조공적가역성,이급기대소서MSCs중인IFN-γ기인표체적조공작용.방법:지질체개도pTet-off화pTre-IFN-γ질립공전염소서MSCs.용ELISA법검측MSCs배양액중인IFN-γ단백적분비량.파공전염후적MSCs회수급BALB/c라소서,용실시형광정량RT-PCR방법검측각조BALB/c라소서비조직중적IFN-γmRNA함량.결과:용ELISA법가검측도공전염후적MSCs배양액중유IFN-γ단백분비,분비고봉재전72 h내;공전염후84 h가입함300 ng/mL염산사배소적배양액배양12 h,매1×107개세포적분비량위(67.11±22.14)pg,무사배소처리조위(319.96±29.04)pg,량조상비차이유통계학의의(P＜0.001);거제사배소후,IFN-γ단백분비현저증가(P=0.032).용실시형광정량RT-PCR가검측도회수공전염MSCs적각조BALB/c라소서비조직중균유IFN-γmRNA전록,불용사배소처리조최고,체(1.5±0.7)×105copy·(100mg)-1,정기사배소처리조위(6.9±5.3)×102 copy·(100mg)-1(P＜0.001),접수1차사배소처리조표체량개우전량자지간,차이균유통계학의의(P＜0.01).결론:Tet-off계통재체외화체내도가이신속、유효지조공인IFN-γ기인재소서MSCs중적표체,이차조공시가역적.