四川大学学报(医学版)
四川大學學報(醫學版)
사천대학학보(의학판)
JOURNAL OF WEST CHINA UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2007年
6期
929-933
,共5页
党洪胜%李伟%沈彬%杨静%周宗科%裴福兴%鲁芳%彭文珍
黨洪勝%李偉%瀋彬%楊靜%週宗科%裴福興%魯芳%彭文珍
당홍성%리위%침빈%양정%주종과%배복흥%로방%팽문진
肝细胞生长因子%成骨细胞%基因转染
肝細胞生長因子%成骨細胞%基因轉染
간세포생장인자%성골세포%기인전염
目的 构建人肝细胞生长因子(hHGF)真核表达质粒,探讨重组质粒对体外培养胎兔成骨细胞增殖分化的影响,为转基因治疗骨科疾病提供实验基础.方法 RT-PCR扩增人肝脏中hHGF全长cDNA片段,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,用脂质体法将pcDNA3.1(+)-hHGF质粒转染成骨细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,用免疫荧光染色检测hHGF基因在成骨细胞内的表达;MTT法和FCM检测pcDNA3.1(+)-hHGF转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;采用RT-PCR和ELISA方法检测hHGF在成骨细胞中的表达.NPP法检测碱性磷酸酶合成情况.结果 成功构建hHGF真核表达质粒,免疫组化和RT-PCR检测显示转染成骨细胞后细胞内hHGF mRNA呈现高水平表达;MTT法和FCM检测显示重组质粒转染后能促进成骨细胞的增殖,S期细胞比例增多;ELISA法检测到hHGF在细胞中有分泌性表达.转染重组质粒的成骨细胞合成碱性磷酸酶能力显著提高.结论 成骨细胞经基因转染后可以表达hHGF,外源性hHGF基因能够刺激成骨细胞增殖、分化及成骨活性.
目的 構建人肝細胞生長因子(hHGF)真覈錶達質粒,探討重組質粒對體外培養胎兔成骨細胞增殖分化的影響,為轉基因治療骨科疾病提供實驗基礎.方法 RT-PCR擴增人肝髒中hHGF全長cDNA片段,剋隆入pcDNA3.1(+)真覈錶達載體中,用脂質體法將pcDNA3.1(+)-hHGF質粒轉染成骨細胞,通過G418篩選穫得暘性剋隆,用免疫熒光染色檢測hHGF基因在成骨細胞內的錶達;MTT法和FCM檢測pcDNA3.1(+)-hHGF轉染後對細胞增殖和細胞週期的影響;採用RT-PCR和ELISA方法檢測hHGF在成骨細胞中的錶達.NPP法檢測堿性燐痠酶閤成情況.結果 成功構建hHGF真覈錶達質粒,免疫組化和RT-PCR檢測顯示轉染成骨細胞後細胞內hHGF mRNA呈現高水平錶達;MTT法和FCM檢測顯示重組質粒轉染後能促進成骨細胞的增殖,S期細胞比例增多;ELISA法檢測到hHGF在細胞中有分泌性錶達.轉染重組質粒的成骨細胞閤成堿性燐痠酶能力顯著提高.結論 成骨細胞經基因轉染後可以錶達hHGF,外源性hHGF基因能夠刺激成骨細胞增殖、分化及成骨活性.
목적 구건인간세포생장인자(hHGF)진핵표체질립,탐토중조질립대체외배양태토성골세포증식분화적영향,위전기인치료골과질병제공실험기출.방법 RT-PCR확증인간장중hHGF전장cDNA편단,극륭입pcDNA3.1(+)진핵표체재체중,용지질체법장pcDNA3.1(+)-hHGF질립전염성골세포,통과G418사선획득양성극륭,용면역형광염색검측hHGF기인재성골세포내적표체;MTT법화FCM검측pcDNA3.1(+)-hHGF전염후대세포증식화세포주기적영향;채용RT-PCR화ELISA방법검측hHGF재성골세포중적표체.NPP법검측감성린산매합성정황.결과 성공구건hHGF진핵표체질립,면역조화화RT-PCR검측현시전염성골세포후세포내hHGF mRNA정현고수평표체;MTT법화FCM검측현시중조질립전염후능촉진성골세포적증식,S기세포비례증다;ELISA법검측도hHGF재세포중유분비성표체.전염중조질립적성골세포합성감성린산매능력현저제고.결론 성골세포경기인전염후가이표체hHGF,외원성hHGF기인능구자격성골세포증식、분화급성골활성.
