生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
919-923
,共5页
黄岩山%金荣%刘晓妮%王昌梅%戎亚雯%陈智
黃巖山%金榮%劉曉妮%王昌梅%戎亞雯%陳智
황암산%금영%류효니%왕창매%융아문%진지
聚乙二醇化修饰%重组人粒细胞集落刺激因子突变体%纯化%鉴定
聚乙二醇化脩飾%重組人粒細胞集落刺激因子突變體%純化%鑒定
취을이순화수식%중조인립세포집락자격인자돌변체%순화%감정
研究了重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)的聚乙二醇化修饰、分离纯化和活性鉴定.通过对人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)第1,3,4,5,17位氨基酸进行突变,并在C末端加了一个半胱氨酸,获得了体外活性为原型rhG-CSF150%以上的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF).然后用分子量为20kD的甲氧聚乙二醇马来酸酐(mPEG-Mal)修饰rmhG-CSF,反应混合物经离子交换和凝胶过滤柱纯化,得到纯化的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子突变体(PEG-rmhG-CSF).SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的PEG-rmhG-CSF的纯度大于95%,体外活性分析表明PEG-rmhG-CSF活性优于目前临床使用的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF,Neulasta(R)),药代动力学研究表明PEG-rmhG-CSF体内半衰期约为14h,比修饰前延长了7倍.
研究瞭重組人粒細胞集落刺激因子突變體(rmhG-CSF)的聚乙二醇化脩飾、分離純化和活性鑒定.通過對人重組粒細胞集落刺激因子(rhG-CSF)第1,3,4,5,17位氨基痠進行突變,併在C末耑加瞭一箇半胱氨痠,穫得瞭體外活性為原型rhG-CSF150%以上的重組人粒細胞集落刺激因子突變體(rmhG-CSF).然後用分子量為20kD的甲氧聚乙二醇馬來痠酐(mPEG-Mal)脩飾rmhG-CSF,反應混閤物經離子交換和凝膠過濾柱純化,得到純化的聚乙二醇重組人粒細胞集落刺激因子突變體(PEG-rmhG-CSF).SDS-PAGE電泳分析錶明純化後的PEG-rmhG-CSF的純度大于95%,體外活性分析錶明PEG-rmhG-CSF活性優于目前臨床使用的聚乙二醇重組人粒細胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF,Neulasta(R)),藥代動力學研究錶明PEG-rmhG-CSF體內半衰期約為14h,比脩飾前延長瞭7倍.
연구료중조인립세포집락자격인자돌변체(rmhG-CSF)적취을이순화수식、분리순화화활성감정.통과대인중조립세포집락자격인자(rhG-CSF)제1,3,4,5,17위안기산진행돌변,병재C말단가료일개반광안산,획득료체외활성위원형rhG-CSF150%이상적중조인립세포집락자격인자돌변체(rmhG-CSF).연후용분자량위20kD적갑양취을이순마래산항(mPEG-Mal)수식rmhG-CSF,반응혼합물경리자교환화응효과려주순화,득도순화적취을이순중조인립세포집락자격인자돌변체(PEG-rmhG-CSF).SDS-PAGE전영분석표명순화후적PEG-rmhG-CSF적순도대우95%,체외활성분석표명PEG-rmhG-CSF활성우우목전림상사용적취을이순중조인립세포집락자격인자(PEG-rhG-CSF,Neulasta(R)),약대동역학연구표명PEG-rmhG-CSF체내반쇠기약위14h,비수식전연장료7배.
